培養糸球体内皮細胞におけるエンドセリン変換酵素の発現調節

培养肾小球内皮细胞内皮素转换酶表达的调节

• 批准号: 08770898
• 负责人: 内田 啓子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770898/
• 关键词: 糸球体内皮細胞; ECE-1; PKC; ET-1

1995年に報告されたbovine endothelin converting enzyme-1(ECE-1)のsequenseを参考に、open reading frameを含むprimerを合成し、PCR法にてprobeを作製し、sequenseを確認した。すでに確立された方法で、bovineの糸球体内皮細胞を培養し、まず刺激のない状態でECE-1の発現があるかどうかを確認した。mRNA採取前24時間、血清を除去したmediumで培養し、mRNAを採取した。発現量は少ないこが予想されたため、Northan blotではなくribonuclease protection assay (RPA)にて、発現を確認した。前述の条件下で採取したmRNAを、独自に作製したprobeを用いてRPA法を行ったところECE-1の発現を認めた。さらにsecond messengerであるPKC,cAMP,cGMPの関与を検討するため、各々の刺激剤で糸球体内皮細胞を刺激した。cAMP,cGMPの刺激剤には反応がなかったが、PKCの刺激剤により発現の増強が認められた。従って、ET-1の発現調節と同様に細胞内の調節機構にはPKCが強く関与していることが示唆された。

In 1995, bovine endothelin converting enzyme-1(ECE-1) sequence was reported for reference, open reading frame, primer synthesis, PCR probe preparation, and sequence confirmation. To establish the method, culture and stimulation of endothelial cells of bovine and confirm the development of ECE-1. mRNA was taken 24 hours ago, serum was removed, mRNA was taken. The amount of detection is less than the amount of detection, and the amount of detection is less than the amount of detection, and the amount of detection is less than the amount of detection. Under the above conditions, we can use the RPA method to detect ECE-1. In addition, the second messenger also stimulated the endothelial cells of the human body by stimulating PKC,cAMP and cGMP. cAMP,cGMP and PKC are stimulants that increase in activity. The expression of PKC and ET-1 is regulated by intracellular regulatory mechanisms.

项目成果

KEIKO UCHIDA et.al.: "Regulated Expression of Endothelin Converting Entymes in Glomernlar Endothelin cells" Journal of American Saiety of Nephrology. 8. 580-585 (1997)

KEIKO UCHIDA 等人：“肾小球内皮素细胞中内皮素转化酶的调节表达”美国肾脏病学杂志。