培養ヒト食道上皮細胞、線維芽細胞を用いた組織再構築型人工食道の開発

利用培养的人食管上皮细胞和成纤维细胞开发组织重建人工食管

• 批准号: 08770998
• 负责人: 三木 浩榮
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770998/
• 关键词: 人工食道; 線維芽細胞; ヒト食道上皮細胞; コラーゲンゲル; 細胞培養; 腹直筋弁; 管腔; 移植

組織再構築型人工食道の開発の為,正常ヒト食道上皮細胞,正常ヒト線維芽細胞を用い以下の実験を行つた.(方法)30mmのdish上で,PGA meshとヒト食道粘膜固有層由来の線維芽細胞8×10^5個/mlを包埋した豚腱由来TypeIaコラーゲンゲル2mlをゲル化させ,その上面に食道新鮮切除標本の正常食道粘膜を酵素処理して得られた食道上皮細胞2×10^5個/cm^2を播種した.Keratinocyte growth mediumと10%FCS添加Dulbecco MEMにより,上皮細胞がconfluentになったところで,dishより剥離し,2cm平方にトリミングしたものの両端を縫合し管腔を作製した.この管腔をヌードラット腹直筋弁に移植した.(結果)移植後7日目にヌードラットより,腹直筋弁に被覆されたPGAメッシュチューブを摘出したところ,長径2cm,内径6mmの管腔が作製されていた.組織像では,内腔は全周性に重層化したヒト食道上皮細胞で被覆され,管腔の狭窄はみられなかった.外側より筋層,PGAメッシューコラーゲン複合体,線維芽細胞包埋コラーゲン層,培養ヒト食道上皮細胞が層構造となり正常の食道組織に類似した構造が再構築された.強拡大像においては,線維芽細胞包埋コラーゲン層の上方に,食道上皮細胞が8層以上に重層化して,細胞の形態も分化傾向を示した.移植後14日目に摘出した管腔の組織像では,内腔は全周性に約20層に重層化したヒト食道上皮細胞で被覆され,間質への慢性炎症性細胞の浸潤は軽度で,新生血管の増生を認めた.移植後23日目においても管腔は維持された.

The development of tissue-reconstructed artificial esophagus is divided into normal esophageal epithelial cells and normal esophageal vascular buds. (Method) On a 30mm dish,PGA mesh was used to embed 8×10^5 cells/ml from esophageal mucosa propria and 2ml from tendon propria.Keratinocyte growth medium and 10%FCS were added to Dulbecco MEM. Epithelial cells confluent,dish peeled, 2 cm square, suture end, control lumen. The lumen of the tube is not straight, but straight. 7 days after transplantation, the diameter of the lumen was 2 cm and the diameter of the lumen was 6 mm. Tissue imaging: The lumen is completely stratified. Esophageal epithelial cells are coated. The lumen is narrow. The structure of the outer layer of esophageal epithelium and the structure similar to that of the normal esophageal tissue were reconstructed. In addition, the epithelial cells of esophagus were stratified into more than 8 layers, and the morphological differentiation tendency of the cells was shown. At 14 days after transplantation, the lumen tissue images were extracted, and the lumen was completely surrounded by about 20 layers of stratified esophageal epithelial cells. The interstitial tissue was infiltrated by chronic inflammatory cells, and the growth of new blood vessels was recognized. 23 days after transplantation, the lumen was maintained.