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培養ヒト食道上皮細胞線維芽細胞及び平滑筋細胞を用いた組織再構築型人工食道の開発

利用培养的人食管上皮细胞、成纤维细胞和平滑肌细胞开发组织重建人工食管

基本信息

批准号：
07771014
负责人：
三木浩榮
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

組織再構築型人工食道開発のため、正常ヒト食道上皮細胞、正常ヒト線維芽細胞を用いて以下の実験を行った。1.ヒト食道由来の線維芽細胞と上皮細胞の培養食道癌新鮮切除標本より、ディスパーゼを用いて食道上皮と粘膜固有層に分離した。次にトリプシンを用いて、上皮からは食道上皮細胞を、粘膜固有層からは線維芽細胞をそれぞれ分離して、継代培養する事に成功した。2.in vitroにおける、線維芽細胞の食道上皮細胞重層化促進に関する検討1で培養した食道上皮細胞を、線維芽細胞を各種濃度で包埋培養したコラーゲンシート上で培養した。線維芽細胞非包埋シート上での上皮細胞は、培養21日目で2〜3層の重層化に留まったのに対して、線維芽細胞8×10^5個/コラーゲン2ml包埋シート上では、培養21日目に4〜5層に重層化した。さらに16×10^5個/コラーゲン2ml包埋シート上では、培養21日目で17〜18層に重層化し、細胞の形態は基底層から上方に向かい扁平化を呈し分化傾向を認めた。つまり、包埋する線維芽細胞数が多いほど上皮細胞の重層化は促進されることが明らかになった。3.in vivoにおける組織再構築型人工食道の作製ヒト食道由来の上皮細胞、線維芽細胞、PGAメッシュ、コラーゲンからなる管腔を、ヌードラット広背筋弁で被覆するように移植した。移植後14日目に摘出したチューブは、長径2cm、内径6mmの管腔で、内腔の狭窄はみられなかった。組織像においては、管腔の外側から広背筋、PGAメッシュ+線維芽細胞包埋コラーゲン層、食道上皮が層構造をとった。また、上皮細胞は全周14層以上に重層化して、正常の食道上皮の組織像に類似していた。コラーゲン層には新生血管を認め、炎症性細胞浸潤も軽度であった。

Tissue reconstruction type artificial esophagus development, normal esophageal epithelial cells, normal esophageal vascular bud cells were used in the following ways: 1. Esophageal epithelial cells from the esophagus were cultured and freshly excised from esophageal carcinoma. In addition, the isolation and culture of esophageal epithelial cells and epithelial cells from mucosa propria were successful. 2.in vitro culture of esophageal epithelial cells and vascular germ cells in various concentrations. The epithelial cells on the non-embedded cells were cultured for 21 days and then stratified into 2 ~ 3 layers. The cells were 8×10^5 cells/day and then stratified into 4 ~ 5 layers on the embedded cells. 16×10^5 cells/cell were embedded in 2ml of culture medium. After 21 days of culture, 17 ~ 18 layers of cells were stratified. The morphology of cells changed from basal layer to upper layer, and the differentiation tendency was recognized. The number of cells embedded in the vascular buds increased, and the stratification of epithelial cells was promoted. 3.in Vivo Tissue Reconstruction Artificial Esophagus Tissue Reconstruction 14 days after transplantation, the diameter of the lumen was 2 cm, the diameter of the lumen was 6mm, and the lumen was narrow. Tissue image: The outer layer of the lumen, the dorsal tendon, the PGA membrane + the vascular bud cell embedding layer, the esophageal epithelial layer structure. The epithelial cells were stratified to more than 14 layers in the whole circumference, and the tissue images of normal esophageal epithelium were similar. The inflammatory cells in the neovascularization layer were found to be very active.