胃癌腹膜播種性転移におけるマトリックス破壊に関する分子生物学および形態学的検討

胃癌腹膜播散转移基质破坏的分子生物学及形态学研究

• 批准号: 08770994
• 负责人: 五十嵐 直喜
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770994/
• 关键词: 胃癌; 腹膜播種; マトリックス分解酵素; MMP

ヌードマウス可移植性ヒト胃癌細胞株を用いて,胃癌腹膜播種性転移の成立機序についてin vitro,in vivoで検討した.ヌードマウス可移植性ヒト胃癌細胞株(TMK-1)および,ヒトの正常胃壁より樹立した繊維芽細胞をおのおの単独培養,混合培養した.その培養上清を用いて,マトリックス蛋白分解酵素(MMP)の発現について検討した.MMP-2の発現についてGelatin zymographyでの検討ではTMK-1単独の培養上清ではMMP-2の発現は認められなかったがTMK-1と繊維芽細胞の混合培養の上清においてMMP-2の発現は認められ,その発現は培養時間に比例して強く認められた.また,免疫染色はMMP-1モノクローナル抗体(金沢大学がん研究所:岡田保典教授より供与)を用いて行ったところ,癌細胞および線維芽細胞より発現が確認された.in vivoにおいてはTMK-1細胞をBALB/cnuヌードマウスに腹腔内投与し腹膜播種モデルを作製した.腹膜播種巣は腹腔内腸間膜に小結節を形成する.腹腔内投与後5週間後に犠牲死させ,この小結節数をcountし評価を行った.TMK-1細胞と線維芽細胞の培養上清を混ぜたものを腹腔内投与したものはTMK-1細胞単独投与したものに比較して有意(p<0.05)に腹膜播種結節数は多く,腹膜播種の形成に癌細胞のみでなく間葉系細胞が関与していることが示唆された.また,腹膜播種結節をホモジネートしたものをGelatin zymographyでMMP-2の発現について検討したところ,強くMMP-2の活性が認められた.

The transplantable gastric cancer cell line was used in the study. The mechanism of peritoneal seeding of gastric cancer was established in vitro,in vivo. Transplantable gastric cancer cell line (TMK-1) was isolated from normal gastric wall and cultured separately and mixed. The expression of MMP-2 in culture supernatant was studied by Gelatin zymography. The expression of MMP-2 in culture supernatant of TMK-1 alone was studied by Gelatin zymography. Immunostaining for MMP-1 antibody (Kanazawa University Graduate School: Professor Hosei Okada) was used to confirm the development of cancer cells and vascular germ cells in vivo.In vivo, MMP-1 cells were injected intraperitoneally and seeded intraperitoneally. Peritoneal seeding is the formation of small intestinal nodules in the abdominal cavity. After intraperitoneal injection and 5 weeks later, the number of nodules was counted and evaluated.TMK-1 cells and culture supernatant of line cells were mixed and compared with TMK-1 cells alone. The number of nodules seeded peritoneally was significantly higher (p<0.05), and the number of mesenchymal cells seeded peritoneally was related to the formation of cancer cells. In addition, the production of MMP-2 by Gelatin zymography was investigated, and the activity of MMP-2 was enhanced.