アストロサイトに発現するbFGF isoformの機能解析に関する研究

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ラット(Wistar albino)新生仔の海馬を摘出し、アストロサイトの初代培養系を作成した。2回継代後、2.5%fetal calf serum添加minimun essential mediumにて培養し、IL-lb(50U/ml),TNF-a(100ng/ml).EGF(100ng/ml),IL-ib(50U/ml)+TNF-a(100ng/ml)にて24時間刺激した後、アストロサイト細胞抽出液を作成した。現在、得られた抽出液よりヘパリンカラムを用いたbFGFの回収と、ゲル濾過、イオン交換樹脂、ヘパリンカラムを用いた各々のisoformへの分離と、さらに、ラット(Wistar albino)胎仔(E-16)由来の中隔野コリン作動性神経細胞、脳幹部コリン作動性運動神経細胞、中脳黒質ドパミン神経細胞、脊髄運動神経細胞の培養系を作成し、各々のisoformを添加し、2〜7日後の細胞数、choline asetyltransferase(ChAT)活性、およびdopamine uptakeを指標として、各々のisoformのもつ各種神経細胞の分化・生存維持におよぼす効果を検討中である。また、C6 glioma cell lineおよびschwanomma cell line RN22に各々のisoformを添加し、その細胞増殖速度、H^3-thymidine uptake、MIB-1 labeling indexを指標として、各々のisoformの腫瘍増殖におよぼす影響を検討中である。