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アストロサイトにおけるc-Metの発現調節機構に関する研究

星形胶质细胞c-Met表达调控机制研究

基本信息

批准号：
10770691
负责人：
島崎賢仁
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770691/
关键词：
アストロサイトサイトカイン c-Met

项目摘要

ラット新生仔の海馬を摘出し、アストロサイトの初代培養系を作成。2回の継代後、10%fetal calf serum添加minimum essential medium中で培養し、aFGF、bFGF、TNF-α、IL-1β、TFG-β1、EGF、HGFにて24時間刺激した後、アストロサイト細胞抽出液および培養上清を調整した。上記の細胞抽出液および培養上清からc-Metの細胞内ドメインに対する抗体を用いたWestern blot法にて、c-Metの各isoformの定量を行った。c-Metは、アストロサイト細胞抽出液中に検出され、aFGF、bFGFにて発現が増強し、HGFで発現が減少した。また、上記の培養アストロサイトを上記の抗c-Met抗体を使用し、免疫染色した。c-Metは培養アストロサイトの細胞質内に免疫染色性が認められた。上記の培養アストロサイトよりRT-PCRおよびNorthern blot法によるc-met遺伝子のmRNA量の定量、リン酸化チロシンに対する抗体を用いた定量的Western blot法によるc-Met自己リン酸化に対するサイトカインの効果の検討、アイソトープで標識したPiを種々のサイトカインと供に培地に加えたアストロサイトの細胞抽出液から抗Ras血清を用いた定量的Western blot法によるGTP-binding Rasの測定と、Ras活性に対する効果の測定などを、引き続き検討する。

The primary culture system of newborn hippocampus was established. 2. After culture, 10% fetal calf serum was added to the minimum essential medium for culture, aFGF, bFGF, TNF-α, IL-1β, TFG-β1, EGF and HGF. After 24 hours of stimulation, the extract of cells and the supernatant of culture were adjusted. Western blot was used to determine the amount of c-Met isoforms in cell extracts and culture supernatants. c-Met, aFGF, bFGF increased and HGF decreased in cell extracts. The use of anti-c-Met antibodies in culture and immunostaining c-Met is an immunostaining agent in the cytoplasm of cultured cells. In the above mentioned culture medium, RT-PCR and Northern blot methods were used to quantify the mRNA quantity of c-met gene, and Western blot method was used to quantify the antibody of c-Met gene. GTP-binding Ras assay, Ras activity assay, and Ras assay were performed using Western blot assay for quantitative determination of GTP-binding Ras serum and Ras activity.