アポトーシス発現を利用した脳腫瘍に対する抗癌剤感受性試験への応用

利用细胞凋亡表达检测脑肿瘤抗癌药物敏感性的应用

• 批准号: 08771102
• 负责人: 今堀 巧
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771102/
• 关键词: Flow cytometer(FCM); Laser Scanning Cytometer(LSC); Laser-Scan Karyotyping; Apoptosis; DNA; MX-2; pc-buffer法; Tdt assay法

脳腫瘍樹立細胞株T98G,U251MG,U373MG,G1-lを単層培養し、対数増殖期細胞を作り各種抗癌剤ACNU,CDDP VP-16,CBDCA,Strausporine,etcを接触させ、Apoptotic cellの検出とその誘導をおこす至適抗癌剤濃度と誘導時間の検討を行った。Apoptotic cellの検出はFlow-Cytometerを使い、各種抗癌剤を接触させた脳腫瘍細胞をHypototic buffer下でP1によるDNA染色を行い、DNA-histogramより“Sub G1 peak"を検出し、Cell-Sorterで“Sub G1 peak"を選択的に抽出し、Apoptotic cellをMicroscopyにて確認した。さらにAgarose gelを用いた電気泳動法を施行することで特徴的なDNA Ladder patternを証明し、MicroscopyにてDNA染色を行い細胞の凝集、核の断片などを呈した。また、ApopTag TM(Oncor社)によるTat-assayとDNAの二重染色を行い、フローサイメーターで観察しApoptotic cell誘導のcell cycle specificityを検討した、臨床手術より摘出された脳腫瘍細胞をtrypsinのもとで細切し単層培養を行い、得られた1-2代目の培養細胞を材料に、各種抗癌剤を接触させ、Apoptotic cellの検出をFlow-cytometer,Agarose-gelを用いた電気泳動法、Tdt-assay法を行い、定量、定性的に評価し、Apoptotic cellの定量的評価が抗癌剤感受性試験となりうるかどうかを検討した。さらに脳腫瘍患者に対する抗癌剤投与後の臨床経過とともに比較検討した。

脳 swollen sores establish cell lines T98G U251MG, U373MG, G1 -l を cultivate し 単 layer, the number of moral rights colonization period cells を り various anticancer tonic ACNU, CDDP VP - 16, CBDCA, Strausporine, etc を contact さ せ, Apoptotic The cell 検 検 induces とそ <s:1> をお す す to the appropriate anticancer concentration と induction time <s:1> 検 discusses を and った. Apoptotic cell の 検 out は Flow Cytometer - を expose い, all kinds of anti-cancer tonic を さ せ た 脳 swollen sores cells を Hypototic buffer under で P1 に よ dyeing line を い る DNA, DNA - histogram よ り "Sub G1 peak"を検 out を, cell-sorter で "Sub G1 peak"を select に from 択 extract を, Apoptotic cellをMicroscopyにて confirm た. さ ら に Agarose gel を with い た 気 swimming method execute す を る こ と で of 徴 な DNA Ladder pattern を し, Microscopy に て dyeing line を の い cell aggregation, nuclear DNA の fragment な ど を show し た. ま た, ApopTag TM (Oncor) に よ る Tat - assay と の DNA double staining を い, フ ロ ー サ イ メ ー タ ー で 観 examine し Apoptotic cell induced の cell cycle Beg し specificity を 検 た, clinical surgery よ り pick the さ れ た を 脳 swollen sores cells trypsin の も と で fine cut し 単 have training line を い, ら れ た 1-2 generation mesh の train に を materials, all kinds of cancer cell tonic を contact さ せ, Apoptotic Cell の 検 out を Flow cytometer, Agarose gel - を with い た 気 swimming method, the Tdt - line を い assay method, quantitative and qualitative に 価 し, Apoptotic cell の quantitative evaluation 価 が anti-cancer tonic susceptibility test と な り う る か ど う か を beg し 検 た. The に of patients with さらに脳 abscess is compared with the する administration of anticcancer drugs and the subsequent <s:1> clinical experience とと に に 検 is more 検 than た.

项目成果

沼義博: "Laser Scanning Cytometer(LSC)による細胞核および染色体DNA量の解析" Human Cell. 6-3. 237-243 (1996)

Yoshihiro Numa：“使用激光扫描细胞仪 (LSC) 分析细胞核和染色体 DNA 含量”人类细胞 6-3。

沼義博: "MX-2(New Morpholion Anthracyclin)によるHL-60細胞でのアポトーシスの誘導" Cytometory Research. 6-2. 65-70 (1996)

Yoshihiro Numa：“MX-2（新 Morpholion 蒽环素）诱导 HL-60 细胞凋亡”《细胞计量学研究》65-70。