移植培養歯根膜の人工歯根における細胞分化能に関する研究

人工牙根移植培养牙周膜细胞分化能力的研究

• 批准号: 08771904
• 负责人: 福岡 真一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771904/
• 关键词: コラーゲン固定化人工歯根; 歯根膜細胞の三次元培養; TBF-β_1; PDGF; basic-FGF(ヘパリン結合型); オステオネクチン; オステオカルシン; オステオポンチン

前年度まで行ってきた二次元培養の至適条件10% FBS+ TGF-β_1 1ng/ml α-MEMとコラーゲンゲル内の三次元培養を比較した結果 TGF-β_1 10ng/ml添加群において TGF-β_1 1ng/ml添加群より有意に増殖を促進させた。また、PDGFに関しては100ng/ml添加群が最も高い増殖活性を示した。ヘパリン結合型basic-FGFは100ng/ml添加群において最も高い増殖率を示したが、TGF-β_1、PDGF添加群より増殖率は低かった。AlPase活性についてはTGF-β_1 10ng/mL+PDGF100ng/ml添加群において最も活性陽性率が高く、二次元培養培養と比較した結果、約2倍の活性を示した。以上の結果より、歯根膜細胞のコラーゲンゲル内三次元培養では、10% FBS+ TGF-β_1 10ng/mL+PDGF100ng/ml α-MEM添加が最も適した培養条件であると考えられた。非コラーゲンタンパク添加の影響について検索した結果、オステオカルシン(bone Gla protein:以下BGP)オステオポンチン(osteopontin:OPN)オステオネクチン(osteonectin)の各添加群とも、有意な増殖促進効果、ALPase活性はみられなかった。そこで、歯根膜細胞分泌タンパクに注目し、培養上清をIEC-DEAEおよびSDS-PAGEにて分離、分画した結果、推定分子量約25KDa、35KDa、100KDa、160KDa、210KDaに特徴的な単一のバンドが認められた。推定分子量35KDaはその分子量サイズからオステオネクチン、100KDaはプロテオグリカンと推察される。25KDaの低分子領域はリンタンパクの一種、160KDa、210KDa非コラーゲンタンパクの複合体であると推測され、特徴的なタンパク質の存在が示唆され、今後これらの検索が必要であろう。in vivoにおける検索結果では、ヘパリン結合型basic-FGFは100ng/ml単独添加群において豊富な血管新生がみられ、10% FBS+ TGF-β_1 10ng/mL+PDGF100mg/ml α-MEM添加群では成熟した太い歯根膜様線維構造が観察されたが、機械的結合の弱いコラーゲンゲル培養の改良が必要であると考えられた。

In the previous year, the optimal conditions for secondary culture were 10% FBS+ TGF-β_1 1 1ng/ml α-MEM and the optimal conditions for tertiary culture were compared. The results showed that TGF-β_1 10ng/ml was added to the culture medium, and TGF-β_1 1 1ng/ml was added to the culture medium. PDGF was added at 100ng/ml to show the highest reproductive activity. The growth rate of TGF-β_1 and PDGF was the highest at 100ng/ml, and the growth rate was the lowest at 100 ng/ml. Alase activity was highest when TGF-β_1 10ng/mL+PDGF100ng/ml was added, and the activity was about 2 times higher when compared with the results of secondary culture. The results showed that 10% FBS+ TGF-β_1 10ng/mL+PDGF100ng/ml α-MEM was the most suitable culture condition for dental root membrane cells. The results of the investigation on the impact of non-CRF-Grundan-Pakk additions, the various additions of OSTEOKALSCHIN (bone Gla protein: BGP below) OSTEOPANCIN (osteopontin:OPN) OSTEOERCCKIN (osteonectin), the intentional growth-promoting effects, and ALPase activity have been greatly improved. The results of IEC-DEAE and SDS-PAGE separation and analysis of culture supernatant showed that the molecular weights of the three species were estimated to be about 25KDa, 35KDa, 100KDa, 160KDa and 210KDa. Estimated molecular weight 35KDa, estimated molecular weight 100KDa 25KDa low molecular weight domain is a kind of complex, 160KDa, 210KDa non-complex is a kind of complex, the existence of characteristic complex is an indication, the future search is necessary. In vivo, the results showed that the combination of basic-FGF and 100ng/ml of α-MEM alone could enrich angiogenesis, 10% FBS+ TGF-β_1 10ng/mL+PDGF100mg/ml of α-MEM alone could improve the growth and development of vascular endothelial cells.

项目成果

日高丈博,福岡真一他4名: "コラーゲン・ゲル内三次元培養における歯根膜細胞の性状と人工歯根に対する細胞付着の検討" 生体材料. 15巻2号. 63-70 (1997)

Takehiro Hidaka、Shinichi Fukuoka 等 4 人：“胶原凝胶三维培养中牙周膜细胞的特征以及细胞附着于人工牙根的检查”，《生物材料》，第 15 卷，第 2 期，第 63-70 期（1997 年）。