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トマトアルターナリア茎枯病菌における宿主特異的AL毒素生産の分子機構

番茄链格孢茎枯病真菌产生宿主特异性AL毒素的分子机制

基本信息

批准号：
09760044
负责人：
児玉基一朗
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

トマトアルターナリア茎枯病菌(Alternaria alternata tomato pathotype、以下、茎枯病菌)の特定のトマト品種に対する病原性は、本菌の生産する宿主特異的毒素であるAAL毒素に依存している。本研究は、茎枯病菌を用いて、Restriction Enzyme Mediated Integration(REMI)を利用した遺伝子タギング法により、AAL毒素生合成に関与する遺伝子のクローニングを行うことを目的とする。毒素生合成遺伝子が同定されれば、遺伝子破壊実験などにより、病原性因子としてのHSTの位置づけを明確にすることが出来る。本年度は、前年度に引き続き、茎枯病菌に対してREMI法による形質転換を行い、プラスミドの組込によってタッグした変異体のライブラリーを作成した。このREMIライブラリーより、感受性トマト葉を用いた生物検定法およびHPLC分析による毒素定量法を利用して、毒素生産に関する変異体のスクリーニングを行った。その結果、約1000個の形質転換体より6個体の毒素非生産変異体が得られた。これら変異体のゲノムDNAより、プラスミドレスキュー法、あるいはPCR法により挿入プラスミドのフランキングDNA領域を回収した。現在、回収DNA断片のシークエンス解析およびジーンターゲッティングによりその毒素生産との関わり合いを検討中である。さらに、これら毒素非生産変異体にGUS遺伝子を導入することによりマーカー菌株を作成し、トマト葉への接種実験を行った。その結果、毒素非生産変異体は、感受性トマト組織に侵入・定着する能力を失っており、宿主特異的な病原性も失活していることが示された。以上の結果より、茎枯病菌において病原性決定因子としてのAAL毒素の病理学的意義が明確となった。

Alternaria alternata tomato pathotype, following, stem blight fungus) specific species of pathogenicity, production of this bacterium, host-specific toxins, AAL toxin dependence. In this study, stem blight fungus was used, Restriction Enzyme Mediated Integration (REMI) utilizes した缝子タギング法により, AAL toxin biosynthesis に关 and する缝子のクローニングを行うことをpurpose とする. Toxins are produced and synthesized, and the pathogenic factors are eliminated. This year's disease, the previous year's disease, stem blight fungus disease, REMI method, change of shape and quality.行い、プラスミドの组込によってタッグした変variant のライブラリーを成した.このREMIライブラリーより, sensitive トマト叶を were analyzed by いたbio検determination method およびHPLC Analysis of the quantitative method of toxins and the utilization of toxin production methods. As a result, approximately 1,000 morphologically modified bodies, 6 individual toxin-free mutants, were produced.これら変variant DNAより、プラスミドレスキュー法、あるいはThe PCR method is used to insert DNA into the DNA field and recover it. Now, we will collect and analyze the DNA fragments and analyze them.ッティングによりそのtoxicant production との关わり合いを検同中である.さらに、これら Toxin non-production variant にGUS legacy 伝子を introduction することThe によりマーカー strain is made, and the トマト叶への inoculation 実験を行った. Result, toxin non-production variant, sensitive tissue invasion and fixation ability, host-specific pathogenic inactivation, and host-specific inactivation.以上の結果より、茎枯病菌において病原性決定因子としてのAAL毒素の病理学的意義が明確となった。