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遺伝子タギング法によるトマトアルターナリア茎枯病菌の病原性遺伝子のクローニング

基因标签法克隆番茄链格孢茎枯病病原基因

基本信息

批准号：
08760045
负责人：
児玉基一朗
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760045/
关键词：
トマトアルターナリア茎枯病菌宿主特異的毒素 Alternaria alternata

项目摘要

本研究は、トマトアルターナリア茎枯病菌(Alternaria alternata tomato pathotype)を用いて、Restriction Enzyme Mediated Integration(REMI)を利用した遺伝子タギング法により、本来の病原性(力)が変化した突然変異体を取得した後、変異体から、その表現形、すなわち病原性(力)に関与する遺伝子のクローニングを行い、他の遺伝子との相同性解析、遺伝子破壊などの手法を用いてその機能を明らかにすることを目的とする。まず、茎枯病菌に対してREMI法による形質転換を行い、プラスミドの組込によってタッグした変異体のライブラリー(REMIライブラリー)を作成した。プラスミドの組込み様式を解析した結果、REMI法により、通常のプラスミドタギングと比較して、形質転換頻度が上昇し、組込み様式が単純になることが示され、REMI法の有効性が確認された。このREMIライブラリーより、感受性トマト葉を用いた生物検定法およびHPLC分析による毒素定量法を利用して、毒素生産に関する変異体のスクリーニングを行った。その結果、約1000個の形質転換体より3個体の毒素非生産変異体が得られた。さちに、これら変異体の接種実験の結果、毒素非生産変異体は、感受性トマトに対する病原性も失活していることが示され、毒素生産能と病原牲の相関が明確となった。現在、変異体のゲノムDNAより、プラスミドが挿入された近傍のDNA断片をPCR法により回収し、その毒素生産との関わり合いを検討中である。

In this paper, the pathogen of stem blight was studied (Alternaria alternata tomato pathogen) is used to restrict Enzyme Mediated Integration(REMI). The original pathogenicity (force) is changed to a sudden change. After the change, the expression is changed. The pathogenicity (force) is related to the transmission. The identity analysis of other genes is carried out. The purpose of the game is to make sure that the game is played properly. The REMI method is used to create a new type of pathogen, such as a pathogen, a pathogen, and a pathogen. The analysis results of the group formula of different types of materials, the comparison between the REMI method and the general group formula, the increase in the frequency of physical and qualitative changes, the purity of the group formula, and the effectiveness of the REMI method are confirmed. The REMI assay was performed using bioassay and HPLC analysis for toxin quantification. As a result, about 1000 of the qualitative changes in 3 individuals were obtained. The results of inoculation of the toxin, the non-production of the toxin, the inactivation of the susceptibility to the pathogen, the production of the toxin and the correlation with the pathogen are clear. Now, we have to investigate the relationship between DNA fragmentation and toxin production.