双子葉植物α-amylaseの細胞内局在性とそれに関与する因子の同定

双子叶植物α-淀粉酶细胞内定位及其相关因子的鉴定

• 批准号: 09760062
• 负责人: 森 春英
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760062/
• 关键词: Phaseolus vulgaris; α-amylase; 細胞内局在性; Gus; 遺伝子; GUS

双子葉植物であるPhaseolus vulgarisにおいて、α-amylaseにアイソザイムは存在せず、発芽子葉と緑葉において同一の酵素が発現する。この同一のタンパク質が器官特異的な因子により異なる細胞内オルガネラに標的されている可能性を確認するために、まずPhaseolus vulgarisにおいてα-amylaseの細胞内局在性の確認と、発現制御の観点から遺伝子のクローニングを行った。(1) Phaseolus vulgarisにおける細胞内局在性の確認:Phaseolus vulgaris緑葉および発芽子葉における酵素の細胞内局在性を明らかにすることを目的に、ショ糖密度勾配法を用いた細胞内器官分画を行った。これにより、本酵素は子葉においてはプラスチド画分にあることが示唆され、一方緑葉においては少なくとも葉緑体画分に酵素は検出されなかった。さらに明確にするために、金コロイドによる免疫電子顕微鏡像を作製する。抗体を調製した。(2) Arabidopsisの形質転換(減圧浸潤法)をpBl121を用いて行った。また、pBl121上のGUSのN型糖鎖付加配列(-)の変異体GUS N356Sをレポーターに持つpBl124を創出した。これを用いて、本酵素上の器官特異的細胞内局在性因子を解析する。(3) α-Amylase遺伝子のクローニング:P.vulgans α-amylase遺伝子を単離した。本遺伝子は植物α-amylaseに共通の4エキソン-3イントロン構造をもつ。転写開始点はATG開始コドンの上流33nt。主な推定シス因子を示す。 TATA box(-31),pyrimidine box(-361),イネ、オオムギ、コムギα-amylase遺伝子間で認められたコンセンサス配列TACAAGA様配列(-1364,-1608)。

Dicotyledonous plant であるPhaseolus vulgaris において, α-amylase にアイソザイムは existence せず, 発 sprout cotyledon とgreen leaves において the same enzyme が発appears する.この Same substance が Organ-specific な factor によりdifferent なる intracellular オルガネラに名されているpossibilityをconfirmationするために、まずPhaseolus Confirmation of the intracellular localization of vulgaris α-amylase, and detection of intracellular localization of vulgaris. (1) Confirmation of intracellular localization of Phaseolus vulgaris: Phaseolus vulgaris green leaves および発 cotyledons における enzyme の intracellular localization を明らかにすることをpurpose に、ショsugar density matching method を いた intracellular organ division を row った.これにより、This enzyme is made of cotyledons and leaves.れ、One side of the green leaves has a small amount of chloroplast drawing and enzymes.さらにclear にするために,金コロイドによるimmune electronic 镕Micromirror をproduced する. Antibodies are prepared. (2) Arabidopsis transformation (reduced pressure infiltration method) is performed using the same method.また、The GUS N-type sugar lock on pBl121 is added with the (-) allogeneic GUS N356S and the pBl124 is created. This enzyme is used to analyze the organ-specific intracellular localized factors on this enzyme. (3) α-Amylase缝子のクローニング: P.vulgans α-amylase缝子を単里した. The structure of α-amylase in this plant is the same as that of the plant α-amylase. The starting point of writing is はATG starting コドンのupper stream 33nt. The main inferred シス factor is shown. TATA box(-31),pyrimidine box(-361), イネ, オオムギ, コムギα-amylase 伝子间でcognizeめられたコンセンサス array TACAAGA様array (-1364,-1608).

项目成果

H.Mori: "Amylases and Branching Enzyme of Developing Kidney Bean Seeds on Native Electrophoretic Gel" Oyo Toshitsu Kagaku(J.Appl.Glycosci.). 45・2. 117-122 (1998)

H.Mori：“在天然电泳凝胶上开发芸豆种子的淀粉​​酶和分支酶”Oyo Toshitsu Kagaku（J.Appl.Glycosci.）45・2（1998）。

H.Mori: "Molecular Cloning of an α-Amylase cDNA from Germinating Cotyledonsof Kidney Bean(Phaseolus vulgaris L.cv Toramame)" Oyo Toshitsu Kagaku(J.Appl.Glycosci.). 45・3. 261-267 (1998)

H.Mori：“来自芸豆萌芽子叶的 α-淀粉酶 cDNA 的分子克隆”Oyo Toshitsu Kagaku（J.Appl.Glycosci.） 45·3（1998）。