魚類卵母細胞の成熟過程に関する分子生物学的解析

鱼类卵母细胞成熟过程的分子生物学分析

• 批准号: 09760177
• 负责人: 吉崎 吾朗
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760177/
• 关键词: 卵成熟能; 生殖腹刺激ホルモン; コネクシン; ギャップ結合; cAMP; 卵母細胞; 成熟; 生殖腺刺激ホルモン; 盧胞細胞; コダイ

1. 卵成熟能獲得時に発現するコネクシンcDNAのクローニングマダイの成熟直前の卵巣からRNAを抽出し、degeneratePCRおよびRACE-PCRによりコネクシンcDNAを増幅し、その構造解析を行った。2種類のコネクシン様cDNAが単離され、両クローンともに既知のコネクシンに共通して見られる特徴を備えていた。1つのクローンは分子量31.5KDaのタンパク質をコードしていた。他方は大西洋産ニベのコネクシン32.7と非常に高い相同性を示したため、マダイにおけるコネクシン32.7ホモログであると判断された。2. コネクシン遺伝子発現におけるcAMP-PKA系の関与卵成熟能獲得以前の卵巣片を細胞内cAMP量を上昇させる試薬であるフォルスコリンとともに培養することにより、卵成熟能が誘起されたと同時に、コネクシン32.2遺伝子の発現量も上昇した。さらにGtHによる卵成熟能の獲得はPKA阻害剤で完全に抑制されたが、同処理によりコネクシン32.2の発現も完全に阻害された。以上の結果を既知の情報と併せてまとめると、まずGtHは卵成熟能獲得以前の卵巣に働きかけ、細胞内cAMP量を上昇させることにより、PKA系を活性化する。それに続いて、この活性化されたPKA系によりコネクシン32.2遺伝子の転写が促進され、卵母細胞-顆粒膜細胞間のギャップ結合合成が促された。これと同時に卵母細胞はMISに対する感受性すなわち卵成熟能を獲得した。これらの事実より、GtHが誘起する卵成熟能の獲得過程にはコネクシン32.2遺伝子の発現、さらに卵母細胞-顆粒膜細胞間のギャップ結合合成が重要な役割を果たしていると考えられた。今後このギャップ結合の働きを解明していく必要があると考えられる。

1. The eggs mature can obtain に 発 now す る コ ネ ク シ ン cDNA の ク ロ ー ニ ン グ マ ダ イ の way mature の eggs 巣 か ら RNA を spare し, degeneratePCR お よ び RACE - PCR に よ り コ ネ ク シ ン cDNA を raised し, そ の structure line を っ た. 2 kinds の コ ネ ク シ ン others cDNA が 単 from さ れ, struck ク ロ ー ン と も に already know の コ ネ ク シ ン に common し て see ら れ る, 徴 を prepared え て い た. 1 た <s:1> ロ ロ ロ <s:1> た た molecular weight 31.5KDa タ タ パ パ carbon をコ ド ド て た た た. Fang は Atlantic produce ニ ベ の コ ネ ク シ ン 32.7 と very high に い identity を shown し た た め, マ ダ イ に お け る コ ネ ク シ ン 32.7 ホ モ ロ グ で あ る と judgment さ れ た. 2. コ ネ ク シ ン posthumous son 伝 発 now に お け る cAMP - PKA is の masato and mature eggs can obtain の eggs before 巣 を intracellular cAMP amount rising を さ せ る try 薬 で あ る フ ォ ル ス コ リ ン と と も に cultivate す る こ と に よ り, mature eggs can が induced さ れ た と に, at the same time コ ネ ク シ ン 32.2 heritage 伝 son の 発 now rising volume も し た. さ ら に GtH に よ る mature eggs can get は の PKA resistance against tonic で に completely inhibit さ れ た が, with 処 に よ り コ ネ ク シ ン 32.2 の 発 も now completely に resistance against さ れ た. Above を の results already known の intelligence と and せ て ま と め る と, ま ず GtH は eggs mature can obtain の eggs before 巣 に 働 き か け rising, intracellular cAMP を さ せ る こ と に よ り, PKA を activeness す る. そ れ に 続 い て, こ の activeness さ れ た PKA system に よ り コ ネ ク シ ン 32.2 heritage 伝 son の planning write が promote さ れ, oocyte - particles between membrane cells の ギ ャ ッ プ combined with synthetic が promote さ れ た. <s:1> れと at the same time, に oocyte <s:1> MISに can を acquire た against する sensitive すなわち oocyte maturation. こ れ ら の things be よ り, GtH が induced す る mature eggs can get process の に は コ ネ ク シ ン 32.2 heritage 伝 son の 発 now, さ ら に oocytes - particles between membrane cells の ギ ャ ッ プ combined with synthetic が important な "を cut fruit た し て い る と exam え ら れ た. In the future, <s:1> ギャップ ギャップ will be combined with <s:1> <s:1> を を を く く necessary があると to test えられる.

项目成果

Chang,Patino,Yoshizaki Thomas: "Developmental and Protein Kinase-Dependent Regulation of Orarian Comexin mRNA and OOcyte Maturational Competence in Atlantic Croakor" General and Comparative Endocrinology. (受理済).

Chang，Patino，Yoshizaki Thomas：“大西洋鳕鱼 Orarian Comexin mRNA 和 OO 细胞成熟能力的发育和蛋白激酶依赖性调节”普通和比较内分泌学（已接受）。

吉崎 悟朗: "コネクシン(ギャップ結合タンパク質)遺伝子・魚類のDNA" 恒星社厚生閣, 8 (1997)

吉崎五郎：“鱼的Connexin（间隙连接蛋白）基因和DNA” Seiseisha Koukaku，8（1997）