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ラット卵巣のエイコサノイド産生に関わる細胞質型ホスホリパーゼA2の役割について

细胞质磷脂酶 A2 在大鼠卵巢类二十烷酸生成中的作用

基本信息

批准号：
09760277
负责人：
久留主志朗
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット卵巣の排卵過程における細胞質型PLA2(cPLA2)の発現と役割を検討した。26日齢のラットに性腺刺激ホルモンであるPMSGを、その48時間後にhCGを投与して誘起排卵モデルを作出した。この卵巣では、cPLA2に対する強い免疫組織化学的反応が卵子に観察され、PMSG投与で卵胞膜細胞に、hCG投与で顆粒層細胞に免疫反応が認められるようになった。卵巣サイトゾルのPLA2活性を測定すると、PMSG投与により若干増加するものの、hCG投与後8時間までは低く推移し、以後黄体形成と共に上昇して行った。cPLA2の特異的阻害薬であるarachidonyl trifluoromehtyl ketone(ATK)の添加実験により、この活性の約70%はcPLA2に由来することが強く示唆された。次にhCG投与の8時間後の卵巣嚢内にATK(0.3,1.0,3.0mg)を投与した時の排卵数と卵巣内PG含量に対する効果を検討した。その結果、排卵数は用量依存的に減少し、同量の全身性投与では効果がなかった。卵巣PGE2レベルも有意に半減していた。以上の成績より、ラットの排卵卵胞において、cPLA2が発現し、顕著な活性増加は示さないものの、卵胞のPG産生と引いては排卵過程に寄与していることが示された。さらに、妊娠ラットの黄体PLA2活性を測定したところ、機能的退行時に急激な活性増加と分娩後数日は活性が高く維持され、形態的退行と共に低下して行った。産仔の吸乳刺激を無くした場合、PLA2活性の推移が変化して黄体退縮も抑制された。この黄体PLA2活性は、薬理学的・免疫化学的検討により、数種類のイソ酵素に由来するらしいことが示唆された。

The development of cytoplasmic PLA2 (cPLA2) during ovulation is discussed. 26 days after the start of the pregnancy, PMSG was administered and 48 hours after the start of the pregnancy. The expression of cPLA2 was detected by immunohistochemical staining. PMSG was used to detect the expression of cPLA2 in oocyte membrane cells. hCG was used to detect the expression of cPLA2 in granular cells. The activity of PLA2 was measured at the end of the day, PMSG administration increased, hCG administration decreased, luteal formation increased, and hCG administration decreased. cPLA2 has a specific inhibitory effect on arachidonyl trifluoromehtyl ketone(ATK), and about 70% of its activity is due to its strong inhibitory effect on cPLA2. The effects of ATK(0.3, 1.0, 3.0 mg) on ovulation and PG content in eggs 8 hours after hCG administration were investigated. The results, ovulation number and dose-dependent decrease, the same amount of systemic injection and results The PGE2 is intentionally reduced. The above results indicate that the ovulatory oocytes are in the middle of the process, cPLA2 is present, the activity of the ovulatory oocytes is increased, and the PG production of the ovulatory oocytes is induced. The activity of PLA2 in corpus luteum was measured during pregnancy, and the activity increased rapidly during functional regression. The activity remained high during the days after delivery, and decreased during morphological regression. In the absence of lactation stimulation, PLA2 activity changes and luteal withdrawal is inhibited. The activity of PLA-2 in corpus luteum was investigated by biochemical and immunochemical methods, and the origin of several enzymes was also investigated.