脊椎動物のPolycomb Group Geneのクローニングとその機能解析

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申請者は、昨年度の研究実施計画に沿って研究を行い、次の結果を得た。マウス神経芽細胞腫由来の細胞株Neuro-2aは、培養液中に牛胎児血清が含まれていると、未分化な状態となりアメーバ形をとる。また牛胎児血清を除くと、Neuro-2aは突起を伸長し神経細胞様に分化する。これは神経細胞の分化の一つのモデルと考えられる。このモデル系において、マウスE(z)相同遺伝子の発現パターンを、転写及び翻訳の両側面から検索した。Northern分析の結果、未分化なNeuro-2aではマウス E(z)相同遺伝子の転写は、ほとんど認められないが、分化誘導下では転写量が著しく増加した。更に未分化状態と分化状態のNcuro-2aにおいて、免疫組織化学的手法を用いてマウス E(z)相同蛋白質の局在を検索した。その結果、神経細胞様に分化したNeuro-2aでは、細胞質、特に突起の基始部及び核に陽性反応が見られ、また未分化なアメーバ様のNeuro-2aでは、細胞質の辺縁に弱い陽性反応が検出された。この実験結果から、マウス E(z)相同蛋白質は神経細胞の分化に関与する可能性が示唆された。マウスE(z)相同遺伝子の成体における組織特異的発現をノーザン分析で調べたところ、脳、胸腺、腎臓、副腎、牌臓および精巣に発現が認められた。この結果を踏まえて、現在マウス E(z)相同遺伝子のmRNA及び蛋白質の胚発生における局在とその消長を、whole mount in situ hybridization法と免疫組織化学的手法を用いて明らにすることを試みている。