転写調節因子E2F-5の正常肺と病患肺における役割に関する研究

转录调节因子E2F-5在正常和患病肺中的作用研究

• 批准号: 09770405
• 负责人: 伊藤 昭英
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770405/
• 关键词: 平滑筋; E2F; 細胞培養; 気管支喘息

昨年度の研究で、ラット気管由来平滑筋細胞は、増殖状態にほぼ無関係に転写調節因子E2F-5を高レベルに発現していることを見いだした。この発現パターンは既に報告した肺動脈由来の平滑筋細胞の場合とほぼ同様で、このことから平滑筋細胞に特異的な機能あるいは形態を付与する遺伝子の調節にE2F-5が与っているとの仮説を立てた。これを検証するため、平滑筋細胞においてE2F-5の機能を直接的に増強あるいは抑制し、それによる形質の変化を観察することにした。その手段として、野生型ならびにdominant-negative型のE2F-5を発現するベクターを入手し、ラット気管および肺動脈に由来する初代培養平滑筋細胞へのトランスフェクションを試みた。dominant-negative型E2F-5の発現ベクターとしてはアミノ酸の1番から256番を欠失したE2F-5DN(1-256)、または同じく58番から256番を欠失したE2F-5DN(58-256)を用いた。トランスフェクションの方法としては、リン酸カルシウム法を用い、まず大腸菌LacZ遺伝子を発現するコントロールベクターを用いて、トランスフェクションの効率を検討した。気管由来平滑筋細胞の場合は、試薬や培養の密度を種々に変えることにより約30%の効率が得られ、ほぼ満足すべきものと考えたが、野生型あるいはdominant-negative型のE2F-5遺伝子をこの条件で導入しても、光顕レベルでの明らかな形態変化や、増殖速度の違いは観察できなかった。今後さらに平滑筋特異的遺伝子発現への影響を観察する予定である。一方、肺動脈由来の平滑筋細胞では、今のところ満足すべきトランスフェクション効率が得られず、他の方法を試みる予定である。

In the past year, the regulatory factor E2F-5 was found in the smooth muscle cells. The expression of E2F-5 in smooth muscle cells of pulmonary artery origin is similar to that in smooth muscle cells of pulmonary artery, and the expression of E2F-5 in smooth muscle cells is similar to that in smooth muscle cells. The function of E2F-5 is directly enhanced, and the quality of E2F-5 is observed. The expression of E2F-5 in primary cultured smooth muscle cells was studied by using different methods, including wild-type and dominant-negative E2F-5. E2F-5DN(1-256) and E2F-5DN(58-256) were found in dominant-negative type E2F-5. The method for producing the recombinant protein is described in detail below. The method for producing the recombinant protein is described in detail below. In the case of smooth muscle cells, the test results show that the density of cultured cells is about 30%, the efficiency is about 30%, and the dominant-negative E2F-5 gene is about 30%. In the future, the influence of smooth tendon specific gene development will be investigated. The smooth muscle cells from which the pulmonary artery originates are the same as those from which the pulmonary artery originates.