肺動脈および気道平滑筋細胞における転写調節因子E2F-5の標的遺伝子解析

肺动脉和气道平滑肌细胞转录调节因子E2F-5的靶基因分析

• 批准号: 13877088
• 负责人: 伊藤 昭英
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877088/
• 关键词: E2F-5; 平滑筋細胞

(1)野生型のE2F-5、(2)pRb,p107,p130などpocket proteinとの結合部位および転写促進に作用する部位を欠失しているが、標的となるDNA配列には結合するため、正常のE2F-5の機能を阻害する、ドミナントネガティブ型のE2F-5、の遺伝子を発現するアデノウイルスベクターを構築している。野生型およびドミナントネガティブ型としてアミノ酸1-250番と57-250番の2種類を含む合計3種のプラスミドは米国ボストン大学のJ.Xiao博士から入手した。これらからcDNA部分を切り出してまずトランスファーベクター(pAdTrack-CMV,米国ジョンスホプキンス大学Vogelstein博士より供与)に組み込んだ。さらに大腸菌内でアデノウイルスのバックボーンプラスミド(pAdEasy,同上)と相同組換えを起こさせることによって目的のcDNAを発現するアデノウイルスベクターを作成した。これをGraham293細胞に移入したが、組換えアデノウイルスは得られず、上記遺伝子の発現が細胞にとって致死的であるものと考えられた。したがって、組換えアデノウイルスの作成の過程では組換え遺伝子の発現がブロックされ、ブロックを解除する蛋白を発現するアデノウイルスを目的の細胞に同時に感染させることによって目的の効果を得るシステムに変更することとし、現在作成中である。in vitroで気管平滑筋細胞を脱分化させる実験では、matrix gla protein,gelatinase Aなどの遺伝子の発現に変化が見られた。これら遺伝子の転写調節領域にE2F-5が結合する可能性について検討中である。

(1)wild-type E2F-5,(2)pRb,p107,p130, pRb, pRb, The wild type has two species, one from 1 to 250 and the other from 57 to 250. There are three species in total. The cDNA fragments were extracted from the DNA fragments of pAdTrack-CMV, which was provided by Dr. Vogelstein of the University of Michigan. In addition, in E. coli, the expression of the target cDNA was generated by the same sequence as pAdEasy (ibid.). The Graham293 cells were transplanted, assembled, and found to be lethal. In the process of making the cell, the protein is generated by the protein, and the target cell is infected simultaneously. In the process of making the cell, the protein is generated by the protein. In vitro, smooth muscle cells dedifferentiate into matrix gla protein, gelatine A, and protein. The E2F-5 may be combined with the E2F-5 in the field of gene regulation.