RT-PCR法によるチロシナーゼ遺伝子ファミリーmRNAの検出とその応用

RT-PCR法检测酪氨酸酶基因家族mRNA及其应用

• 批准号: 09770616
• 负责人: 塚本 克彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770616/
• 关键词: チロシナーゼ; TRP-2; HMB45; メラノーマ

色素細胞に特異的に発現している蛋白には、tyrosinaseだけでなく、TRP-2、HMB45(Pmel17)など複数のものがある。平成9年度の研究で、我々はこれらのmRNAをRT-PCR法によって検出する系を確立した。本年度は、この方法を応用して以下の研究を行った。まずメラノーマ担癌マウスを用いて、in vitroでの血中メラノーマ細胞の存在を、このRT-PCR法によりtyrosinase,TRP-2,HMB45の各mRNAを検出することで確認できるか検討した。具体的には、C57BL/6マウスにB16-F10メラノーマ細胞1x10^6を背部に移植、1週間毎に採血し、この血液よりtotal RNAを抽出後RT-PCRを行い、何週目より血中メラノーマ細胞を検出できるのか検討した。4週後でもtyrosinase mRNAは検出できなかったが、Pmel17のmRNAは2週目より検出できるマウスがあり、4週目にはほぼ全マウスにPmel17のmRNAを検出できた。次に臨床における各ステージのメラノーマ患者60名から採血した血液を、同様の方法でRT-PCRを行い、血中メラノーマ細胞の検出を試みた。いずれの患者からもtyrosinase mRNAの検出はできなかったのに対し、HMB45 mRNAは、stageIでO%、stageII15%、stageIII17%、stageIVで39%に検出でき、HMB45 mRNAの検出がより鋭敏であることがわかった。以上の結果より、これまで報告されているtyrosinase mRNAの検出とHMB45 mRNAの検出を併せることで、実際のメラノーマ患者の血中メラノーマ細胞の検出感度を上げることができると考えられた。

Pigment cell-specific protein expression, tyrosine kinase, TRP-2, HMB45(Pmel17), and multiple protein expression In the study conducted in 2009, we established the mRNA expression system by RT-PCR. This year, the following research has been carried out. The mRNA expression of tyrosine,TRP-2 and HMB-45 was detected by RT-PCR and confirmed by PCR. Specific, C57BL/6, B16-F10 cells 1x10^6, back transplant, 1 week each blood sample, total RNA extracted from the blood RT-PCR, what week each blood sample cell detection and detection 4 weeks later, the expression of cytosine mRNA was detected, and the expression of Pmel17 mRNA was detected at 2 weeks later. 4 weeks later, the expression of Pmel17 mRNA was detected. 60 patients were selected for blood sampling, and RT-PCR was used to detect the cells in the blood. The expression of tyrosine kinase mRNA in the patients was significantly higher than that of HMB45 mRNA in stage I, stage II, stage III and stage IV. The above results show that the expression of tyrosine mRNA and the expression of HMB45 mRNA in the blood of patients are increased.