骨髄性プロトポルフィリン症のhemesynthetaseDNA，m−RNAの測定

骨髓原卟啉症中血红素合成酶 DNA 和 mRNA 的测定

• 批准号: 09770648
• 负责人: 長嶺 安司
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770648/
• 关键词: 骨髄性プロトポルフィリン症; Ferrochelatase; m-RNA

1961年、magnusらは、erythropoietic porphyriaを報告した。本邦においては約100例の報告がみられる。本症の異常はヘム合成系のheme synthetase活性低下の結果、生体にprotoporphyrin IXの沈着がおこり、皮膚においては光照射の結果種々の光線過敏状態を呈する。heme synthetase活性の低下はDNAレベルの異常、m-RNAレベルの異常、酵素蛋白レベルの異常が推測されるが自験例においてはDNAの突然変異の存在が想像された。1990年heme synthetaseのcDNAが明らかにされ、さらに1992年にgenomic DNAが明らかにされた。海外で数例heme synthetaseのm-RNAのpoint mutationが報告されているが、その部位は報告によってまちまちで統一された見解は得られていない。我々は沖縄県のEPP1例、他県のEPP8例に関するcDNAを持っている。まず患者にリンパ球からEB trans formed lymphoblastaid cell lineを作製、増殖したところでtotal RNAを抽出。正常人のcDNAよりPCR法にて増殖したFC cDNAとコントロールとしてのグリセルアルデヒド-3-フォスフェイトデハイドロゲナーゼ(GAPDH)のcDNAをPUC119のHinc II siteに挿入しクローン化して制限酵素処理して得られたプローグを用い、ノザンブロッティングを行った。Ferrochelatase(FC)cDNAのm-RNAを定量するとともにFC遺伝子のクローニングを行い、single strand confomation polymur phsimanalyses(SSCP)法を用いmutationの部位の限定を行った。限定部位のSeguenceをFC mRNAをRT-PCR法より増幅しDH5 α compittant cellに形質転換してクローンをジデオキン法を行った。他県の1症例のFC cDNAの287番目でG→A(Gln→Arg)が全てのクローンで、また287番目A→G(Arg→Gly)は一部のクローンでmutationが認められた。目標に他の症例についても検討を行う予定である。

1961, magnus らは, erythropoietic porphyria を report した. About 100 cases have been reported in this country. The abnormality of this disease is the result of low activity of heme synthetase in the synthesis system, the calmness of protoporphyrin IX in the body, and the result of light exposure to the skin is the result of photosensitivity. heme Low synthetase activity, DNA abnormalities, m-RNA RNA abnormalities, and enzymes The abnormality of the protein and the existence of the abnormality of the DNA are presumed and imagined. 1990 heme synthetaseのcDNAが明らかにされ、さらに1992 にgenomic DNAが明らかにされた. Several overseas examples of heme synthetaseのm-RNAのpoint mutationがreportされているが、そのpartはreportによってまちまちでunificationされた Insightsはgetられていない. I have 1 case of EPP for Okinawa, and 8 cases of EPP for others have been tested for cDNA. The patient's EB trans formed lymphoblastaid cell line is produced and the total RNA is extracted. Normal human cDNA PCR method reproduction method FC cDNAとコントロールとしてのグリセルアルデヒド-3-フォスフェイトデハイドロゲナーゼ(GAPDH)のcDNAをPUC119のHinc II site is inserted into the restriction enzyme treatment, and the enzyme treatment is used. Ferrochelatase(FC)cDNAのm-RNAをquantificationするとともにFC伝子のクローニングを行い、single strand confomation polymur The method of phsimanalyses (SSCP) is limited by mutation and location. Restricted site のSeguenceをFCmRNAをRT-PCR methodよりamplificationしDH5α compittant cellにmorphological changeしてクローンをジデオキン methodを行った. FC of other cases cDNA No. 287 G→A(Gln→Arg) is the whole series, and cDNA No. 287 A→G(Arg→Gly) is the whole series. The target is the patient's symptoms and the patient's symptoms are determined.