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EGF受容体を分子標的としたリコンビナント蛋白による新しい血管病変治療の試み

尝试使用靶向EGF受体的重组蛋白治疗新的血管病变

基本信息

批准号：
09770902
负责人：
渡辺靖夫
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

1. PTCA,CABG,他の末梢血管手術において術後血管再狭窄が問題となっている.これらは血管平滑筋細胞による血管内膜の細胞浸潤によると言われている.内膜の増殖には,EGF,FGF,PDGFなどの増殖因子が関与され,またRNAの分解酵素であるRNaseは,細胞外から導入されるとタンパク合成を阻害すると言われている.ヒト生理活性物質遺伝子のみから作成したヒトNase-ヒトEGF融合タンパクを用いて,ラットおよびヒトの血管平滑筋細胞の増殖抑制を試みた.2. PCR法によりヒトEGFcDNAを増幅し,そのN末端部分とあらかじめクローニングされたヒト膵RNase-cDNAのC末端部を結合させ,発現ベクターに組み込んでプラスミドpRNEGF1を作成した.これを宿主大腸菌BL21DE3株で発現させ,精製して融合蛋白hpRNase-EGFを得た.ラットの胸部大動脈,CABG時に採取したヒトの大伏在静脈および内胸動脈由来の血管平滑筋細胞をout growth法により培養し,得られたサンプルを投与して増殖抑制効果を評価した.評価の方法としては,96ウェルプレートに各ウェル5000の平滑筋細胞をプレーテイングし,24時間後にサンプルを加え,72時間培養後の標識サイミジンの取り込みを指標とした.3. ヒトNase-ヒトEGFは対照として用いたEGFレセプター非発現細胞の標識サイミジン取り込みを抑制しなかったが,EGF過剰発現細胞の標識サイミジン取り込みを抑制した.また,ラットの胸部大動脈平滑筋細胞,ヒトの大伏在静脈および内胸動脈由来の血管平滑筋細胞の標識サイミジン取り込みを抑制した.4. EGFレセプターを分子標的としたヒトNase-ヒトEGFによる新しい抗血管再狭窄治療の可能性が示唆された.

1. PTCA,CABG, and other peripheral vascular surgery are among the problems of postoperative vascular restenosis. The blood vessel smooth muscle cell, blood vessel intimal cell infiltration, blood vessel smooth muscle cell infiltration, blood vessel intimal cell infiltration, blood vessel smooth muscle cell infiltration, blood vessel intimal cell infiltration, blood vessel smooth muscle cell Endothelial proliferation is related to EGF, FGF,PDGF and other growth factors, RNA degradation enzymes, RNase, extracellular introduction, and synthesis inhibition. The growth inhibition of vascular smooth muscle cells was studied by using Nase-EGF fusion protein as a physiologically active substance. 2. PCR was used to amplify EGFcDNA, and the N-terminal part of EGFcDNA was combined with the C-terminal part of EGFcDNA to generate pRNEGF1. The fusion protein hpRNase-EGF was purified from host E. coli BL21DE 3 strain. The thoracic artery,CABG and vascular smooth muscle cells derived from the thoracic artery were cultured out of growth and evaluated for their growth inhibition effects. The method of evaluation is as follows: 96 EGF is used to inhibit the identification of non-producing cells, and EGF is used to inhibit the identification of non-producing cells. The smooth muscle cells of the thoracic arteries, the smooth muscle cells of the thoracic arteries, and the smooth muscle cells of the thoracic arteries, which are derived from the thoracic arteries, are identified by the identification of the smooth muscle cells. 4. EGF is a new molecular marker for vascular restenosis.