乳癌細胞株におけるMUC-1を使用したCTLの誘導

在乳腺癌细胞系中使用 MUC-1 诱导 CTL

• 批准号: 09770909
• 负责人: 渡部 通章
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770909/
• 关键词: 乳癌; CTL; mucl; muc1; shared tumor associated antigen

CTLの確立:乳癌患者から得た、新鮮な腫瘍検体を、物理的、化学的に単離した。腫瘍細胞とリンパ球は非連続勾配Ficoll(75/100%)で分離した。リンパ球は血清添加培地とanti-CD3抗体で48時間培養したあと50UI/mlのIL-2を加えた血清添加培地で培養を続けた。1、3、5週目に放射線処理(10,000rad)した自己腫瘍細胞を10:1の比率で加えた。しかしリンパ球の培養は問題なきものの、腫瘍細胞は思ったように培養できず、混合培養はうまくいかなかった。その原因は定かではない。Acid Elution studiesと抗原の精製も手技の複雑さからか十分量のものは精製できず、今回は精製を断念せざるを得なかった。muc-1 tandem repeatのcore proteinはVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGであり、連続した9アミノ酸11種類を合成し、患者の血液より分離した単核球(単球+リンパ球)と培養し、CTLを誘導した。Peptide-Pulsed Cytotoxicity Assay:T2 cell(HLA class I欠如、HLA-A2陽性、antigen-processing defect in the TAP;class I上にAgを発現できないが外来蛋白をclass I上に結合できる)に生成ペプチドを添加して結合させた物をターゲットとし、これに誘導したCTLを混合培養し、細胞障害活性を非放射性細胞障害測定キットを用いて算出した。12種類のペプチドについて施行した。しかし、結果としては、明らかに特異的に活性を持ったCTLは誘導されていなかった。今後さらに検討が必要であると思われた。

Establishment of CTL: Breast cancer patients are diagnosed, fresh tumors are diagnosed, and physical and chemical lesions are isolated. Tumor cells are separated by non-connected cells mixed with Ficoll (75/100%). The serum of Rinoglobulin was added with PEDI and anti-CD3 antibody was cultured for 48 hours, and 50UI/ml of IL-2 was added and the serum was added with PEDI and the culture was carried out. The 1, 3, and 5 weeks of radiation treatment (10,000 rad) were used to increase the ratio of the own tumor cells to 10:1.しかしリンパパの文化はquestionなきものの, tumor cell は思ったようにculture できず, mixed culture はうまくいかなかった. The reason why is determined is the reason. Acid Elution studiesとantigen のrefined hand skill の富雑さからか十quantity のものは Refined できず, and 日本狠的は Refined をbreak the mind せざるをget なかった. muc-1 tandem repeatのcore Protein synthesis of VTSAPDTRPAPGSTAPPAHG, 11 types of 9-methyl acid, isolation of patient's blood, culture of nuclear spheres (spherules + neutrophils), and induction of CTL. Peptide-Pulsed Cytotoxicity Assay: T2 cell (HLA class I defective, HLA-A2 positive, antigen-processing defect in the TAP; class I上にAgを発现できないがforeign proteinをclass I上にcombinationできる)にGenerationペプチドをaddしてcombinationさせた物をターゲットとし、これにinducing The CTL mixed culture and the cell damage activity were determined using the non-radioactive cytotoxicity assay. 12 kinds of のペプチドについてimplementationした.しかし, としては, 明らかにspecific にactive をholding ったCTL は-induced されていなかった. From now on, I will discuss the necessary issues.