乳癌細胞株におけるMUC-1を使用したCTLの誘導

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CTLの確立:乳癌患者から得た、新鮮な腫瘍検体を、物理的、化学的に単離した。腫瘍細胞とリンパ球は非連続勾配Ficoll(75/100%)で分離した。リンパ球は血清添加培地とanti-CD3抗体で48時間培養したあと50UI/mlのIL-2を加えた血清添加培地で培養を続けた。1、3、5週目に放射線処理(10,000rad)した自己腫瘍細胞を10:1の比率で加えた。しかしリンパ球の培養は問題なきものの、腫瘍細胞は思ったように培養できず、混合培養はうまくいかなかった。その原因は定かではない。Acid Elution studiesと抗原の精製も手技の複雑さからか十分量のものは精製できず、今回は精製を断念せざるを得なかった。muc-1 tandem repeatのcore proteinはVTSAPDTRPAPGSTAPPAHGであり、連続した9アミノ酸11種類を合成し、患者の血液より分離した単核球(単球+リンパ球)と培養し、CTLを誘導した。Peptide-Pulsed Cytotoxicity Assay:T2 cell(HLA class I欠如、HLA-A2陽性、antigen-processing defect in the TAP;class I上にAgを発現できないが外来蛋白をclass I上に結合できる)に生成ペプチドを添加して結合させた物をターゲットとし、これに誘導したCTLを混合培養し、細胞障害活性を非放射性細胞障害測定キットを用いて算出した。12種類のペプチドについて施行した。しかし、結果としては、明らかに特異的に活性を持ったCTLは誘導されていなかった。今後さらに検討が必要であると思われた。