側頭葉てんかんに対する遺伝子療法-海馬へのGABA産生細胞移植-

颞叶癫痫的基因治疗 - 将产生 GABA 的细胞移植到海马 -

• 批准号: 09771051
• 负责人: 本望 修
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771051/
• 关键词: gene therapy; epilepsy; GABA; GAD; transporter

昨年度は、GABA合成酵素であるglutamic acid decarboxylase(GAD)のhuman cDNA expression vector(pC1-neo-GAD)を作製し、lipofection方法にてhuman astrocyteへ導入後、発現をimmunocytochemistoryで確認した。さらに、それに伴う細胞内GABAの上昇をimmunocytochemistoryで確認した。今年度はGAD mRNAの発現をin situ hybridizationにより確認した。さらに、限界希釈法にて細胞内GABA濃度が十分高められた細胞を選別・clonal expansionし、highly expressed cell lineを確立した。また、組胞内GABA濃度の上昇はHPCLによっても確かめた。われわれは、Nipecotic acid(NPA)にはGABA transporterのreverse operationにより細胞内free-GABAを細胞外に放出させる作用があることを以前より提唱しており、この作用を利用して、細胞内free-GABAレベルを間接的に評価してきた。今回の研究でも上記に得られた細胞に対するwhole-cell voltage clamp in vitro下におけるNPAのmicro-applicationによるGABA current(Cl^- current)の測定により、細胞のGABAの含有量とGABA放出能の測定を行なった結果、human GAD遺伝子導入細胞で著名なGABA currentの上昇を認めた。現在、上記細胞をラット脳内に移植し、in vivoにおけるGABA放出能の測定と抗痙攣作用の検討を行なっている。以上のように、補助金は補助条件に従って非常に有効に使用されている。

In the past year, GABA synthase was identified as a human cDNA expression vector(pC1-neo-GAD) by lipofection after introduction of human astrocyte. The increase of intracellular GABA was confirmed by immunocytochemistry. This year, GAD mRNA expression was confirmed in situ hybridization. The cellular GABA concentration is very high, and the cellular expansion is highly expressed. The increase of intracellular GABA concentration in the two groups was due to the increase of HPCL concentration. The reverse operation of GABA transporter by Nipecotic acid(NPA) and its role in intracellular free-GABA release from outside the cell were evaluated indirectly. This paper reports the results of the measurement of GABA current(Cl^- current) in the micro-application of NPA in the presence of a whole-cell voltage clamp in vitro, the measurement of GABA content in cells, and the recognition of the rise of GABA current when human GAD gene is introduced into cells. Now, the study of cell transplantation, in vivo GABA release and anticonvulsive effect is described. The above grant conditions are very relevant to the use of the grant.