骨肉腫細胞におけるビタミンD3、K2の分化誘導作用とP21

维生素 D3、K2 和 P21 对骨肉瘤细胞的分化诱导作用

• 批准号: 09771126
• 负责人: 善明 美千久
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771126/
• 关键词: p21; 骨肉腫; ビタミンD; ビタミンK; 分化; アポトーシス

ビタミンD、Kで骨肉腫細胞(MG63)を刺激し、細胞が分化することをオステオカルシンの産生・PICPの産生・アルカリフォスファターゼ活性を測定することによって確認した。また細胞増殖速度が低下することをMTTassayにて確認した。さらに、細胞周期を解析し、GO期からS期への移行が阻止されていることがわかった。また、その際p21が発現することをRT-PCR法にて確認した。この時点でビタミンD、Kはp21を介して骨肉腫細胞の細胞増殖を抑え、分化誘導することが示唆された。次にこの仮説を確認するためにビタミンD、Kの存在しない条件でアデノウィルスをヴェクターとしてp21を細胞にtransfectionさせ細胞が分化するかどうかを調べた。オステオカルシンの産生・P1CPの産生・アルカリフォスファターゼ活性を測定することによって細胞が実際に分化することを確認できた。次にビタミンD、Kの刺激を1週間以上継続すると細胞が徐々に死んでいくことに着目し、その形態を観察したところ、その細胞死がアポトーシスではないかと推測された。これを確かめるために、電子顕微鏡的観察・細胞周期の解析を行った結果、アポトーシスであることが分かった。しかもアポトーシスが出現する時期に一致してp21が消退することも分かった。以上の結果から、ビタミンD、Kはp21を介して骨肉腫細胞の細胞増殖を抑制、分化を誘導し、p21の消退とともに細胞はアポトーシスを起こすことが結論づけられた。

MG63 cells were stimulated and differentiated, and the production and activity of PICP were determined. Cell growth rate is low and MTTassay is confirmed. Cell cycle analysis, GO phase, S phase and migration are prevented. p21 was detected by RT-PCR. At this time, the expression of p21 was detected in the cell proliferation inhibition and differentiation induction of osteoma cells. In addition, it is necessary to confirm the existence of D and K, and to adjust the differentiation of cells. The production of P1CP and the determination of P1CP activity are important factors for the development of P1CP. For example, if a cell is stimulated for more than one week, it will be observed that the cell is not activated. The results of cell cycle analysis by electron microscope The time period for the first time is the same as that for the second time. The results showed that p21 could inhibit the proliferation and differentiation of osteoma cells, and p21 could inhibit the proliferation and differentiation of osteoma cells.