新しい腎エタクリン酸感受性クロライドATPaseの局在と性質

一种新的肾乙基丙烯酸酯敏感的氯化物 ATP 酶的定位和特性

• 批准号: 09771241
• 负责人: 土井 浩
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771241/
• 关键词: Cl-ATPase; クロライドポンプ; 間在細胞; 集合管; 腎臓; 免疫組織化学; Cl^--ATPase

1. 抗原(Cr依存性ATPasc)蛋白の精製と抗体作製ラット脳由来の520kDaの精製Cl^--ATPase蛋白を家兎に免疫して、抗Cl^--ATpase抗体を作製した。この抗体は、脳および腎由来のEDTA処理形質膜両分のCl^--ATPaseを阻害し、精製Cl^--ATPaseのSDS-PAGE,Western blotting後、51kDa蛋白を認識した。2. 免疫組織化学この抗Cl^--ATpase抗体を用いて、ラット腎組織切片上でのCl^--ATPase蛋白の局在を、尿細管基底細胞膜に局在するNa^+,K^+-ATPaseと集合管主細胞管腔側に局在するAquaporin(AOP2)と比較して観察した。その結果、Cl^--ATPase蛋白は、腎皮質の遠位迂曲部尿細管と結合管および皮質と髄質の集合管の間在細胞の基底膜側細胞膜に局在することがわかった。3. ラット腎Cl^--ATPase活性の検出ラット脳Cl^--ATPase活性の検出法を用いて、5mMウアバイン・2mMアジ化ナトリウム存在下に、腎Cl^--ATPaseの性質を調べた。その結果、腎Cl^--ATPase活性は、脳Cl^--ATPaseと同様に、エタクリン酸により濃度依存的に阻害され、0.3mMでほぼ完全に阻害されることを確認した。また、そのCl^--ATPase活性は、Cl^-濃度がおよそ30mMで最大値に達した。4. ヒト腎Cl^--ATPase活性の検出摘出腎癌の健常皮質部および髄質外層部から作製した酵素標品のCl^--ATPase活性を測定した。その結果、皮質部で3.0および髄質部では2.2(μM Pi/mg protein/hr)の活性が認められた。

1. Antigen (Cr-dependent ATPasc) protein <s:1> refinement と antibody preparation ラット脳 origin <s:1> 520kDa <s:1> refined Cl^ -atpase protein を rabbit に immunization て, anti-cl ^ -atpase antibody を preparation た. <s:1> <s:1> antibody, 脳および renal source <s:1> EDTA treatment of conformal and plasmic membranes, <s:1> Cl^ -atpase を inhibition of <s:1>, refined Cl^ -atpase <s:1> SDS-PAGE, after Western blotting, 51kDa protein を recognition of <s:1> た. 2. Immunohistochemical こ の anti Cl ^ - ATpase antibody を use い て, ラ ッ ト on renal biopsy で の Cl ^ in を, urine protein ATpase の innings, capillary basement membrane に bureau in す る Na +, ^ ^ K + ATpase と manifold cell lumen side に innings in す る Aquaporin (AOP2) と comparative し て 観 Observe た. は そ の result, Cl ^ - ATPase protein, renal cortex の is a thin tube circuity of urine と combined pipe お よ び cortex と marrow qualitative の manifold の in cell membranes に の basement membrane side between innings in す る こ と が わ か っ た. 3. ラ ッ ト renal Cl ^ - ATPase activity の 検 out ラ ッ ト 脳 Cl ^ - ATPase activity の を 検 out method with い て, 5 mm ウ ア バ イ ン · 2 mm ア ジ change ナ ト リ ウ ム に, kidney in the presence of Cl ^ - ATPase の nature を adjustable べ た. そ の results, kidney Cl は ^ - ATPase activity, 脳 Cl ^ - ATPase と with others に, エ タ ク リ ン acid に よ り concentration dependent に resistance against さ れ, 0.3 mM で ほ ぼ completely に resistance against さ れ る こ と を confirm し た. Youdaoplaceholder0, そ, <s:1> Cl^ -atpase activity また, Cl^ -concentration がおよそ at 30mMで maximum value に reaches た た. 4. ヒ ト renal Cl ^ - ATPase activity の 検 out picking out kidney の health department often cortex お よ び marrow and quality, and the outer layer of か ら cropping し た enzyme mark product の Cl ^ - determination of ATPase activity を し た. そ の results, cortex で 3.0 お よ び marrow interstitium で は 2.2 microns (Pi/mg protein/hr) が の activity recognition め ら れ た.

项目成果

Doi H.: "PLURIPOTENT HEMOPOIETIC STEM CELLS ARE C-KIT(LESS-THAN-LOW)" Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.94・6. 2513-2517 (1997)

Doi H.：“多能造血干细胞是 C-KIT（低于低）”美国国家科学院院刊。94・6 2513-2517（1997）

Doi H.: "PLURIPOTENT HEMOPOIETIC STEM CELLS ARE C-KIT (LESS-THAN-LOW)" Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.94・6. 2513-2517 (1997)

Doi H.：“多能造血干细胞是 C-KIT（低于低）”美国国家科学院院刊。94・6 2513-2517（1997）