ブタ幼若エナメル質に含まれるシアリダーゼの精製とシアリル糖鎖の機能について

仔猪牙釉质唾液酸酶的纯化及唾液酸糖链的功能

• 批准号: 09771556
• 负责人: 山越 康雄
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tsurumi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771556/
• 关键词: ブタ幼若エナメル質; ブタ32kDaエナメリン; アスパラギン結合型糖鎖; シアリダーゼ

1. ザイモグラフィーによるエナメルシアリダーゼの検出幼若エナメル質からリン酸緩衝液(pH7.4)抽出にて得られた粗酵素試料を用いてムチンを基質としたザイモグラフィーを行った結果、分子量約24,000付近に活性バンドが認められた。さらにプロテアーゼと区別するために、プロアーゼ阻害剤及びシアリダーゼ阻害剤を用いて同様の実験を行った結果、シアリダーゼ阻害剤である過マンガン酸カリウム、硫酸銅、DDNを含んだそれぞれの緩衝液に反応させると、活性バンドが消失したことより、この24kDaの活性バンドがシアリダーゼであることが示唆された。2. 高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によるシアリダーゼの同定実験32kDaエナメリンからN型糖鎖を酵素的に遊離させ、2-ピリジルアミンで蛍光標識した、PA化糖鎖を用いて、上記粗酵素試料と反応させて、反応前後での逆相HPLCの溶出パターンを比較した結果、モノシアロ糖鎖からアシアロ糖鎖への変化が認められたことより、シアリダーゼの存在が確認された。また、この実験では、α2-6結合よりもα2-3結合でガラクトースに結合しているシアル酸の方が、より早く遊離することもわかった。今後、エナメルシアリダーゼの性質及び32kDaエナメリンの前駆体である89kDaエナメリンに対する作用についても検討しなければならないが、今回の実験により、幼若エナメル質中に含まれるシアリダーゼが量的にかなり少ないことと約15日で失活することも判明したので、これらの点もふまえた実験条件や操作方法の改良が必要とされる。

1. The crude enzyme material was obtained by extraction of the crude enzyme solution (pH7.4). The results showed that the molecular weight was about 24000 and the molecular weight was about 24000. In this paper, the results were compared with each other, and the results were compared with each other in the same area. the results were compared with each other in the same area. the results were compared with each other in the same area. the results were compared with each other in the same area. the results were analyzed in the same way, and the results were analyzed in the same way. Sulfuric acid, sulfuric acid, DDN, sodium chloride, sulfuric acid, sodium chloride, The activity of the 24kDa is the same as that of the others. two。 High-speed liquid chromatography, high-speed liquid chromatography (HPLC), high-speed liquid chromatography, high-speed liquid chromatography, high-speed liquid chromatography Please tell me that there is a confirmation that there is a problem. In the morning, please contact the doctor, the mother, the In the future, you may need to know that there is a significant difference in the amount of money you need to inactivate on the 15th day, in the future, you may need to know that there are no significant differences between the two groups. From now on, you may need to know that there are no significant differences between the two groups in the future. In the future, you will need to know that there is no significant difference between the two groups in the future. In the future, you will need to know that there is an increase in the amount of 32kDa in your body. We need to improve the operation method of conditions.

项目成果

Y.Yamakoshi et.al: "Sites of asparagine-linked oligosaccharides in porcine 32 kDa enamelin" Connective Tissue Research. 39(1-3). 39(343)-46(350) (1998)

Y.Yamakoshi 等人：“猪 32 kDa 牙釉质中天冬酰胺连接的寡糖的位点”结缔组织研究。

Y.Yamakoshi et.al: "Sites of asparagine-linked oligosaccharides in porcine 32 kDa enamel in" Connective Tissue Research. (in press).

Y.Yamakoshi 等人：“猪 32 kDa 牙釉质中天冬酰胺连接的寡糖的位点”，结缔组织研究。