口腔内抗菌性蛋白質の歯質への接着機構の解明と臨床応用への検討

口腔抗菌蛋白对牙齿结构粘附机制的阐明及临床应用思考

基本信息

批准号：
09771697
负责人：
永留初實
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

平成9年度の実験よりリゾチームの正電荷(アミド基)とハイドロキシアパタイトの負電荷(リン酸基)が吸着に関与し、リゾチームはハイドロキシアパタイトへの吸着サイトが抗菌活性部位の反対側であることから吸着状態で抗菌性を保持している可能性を示唆した。この吸着状態での抗菌性に着目し、平成10年度は抗菌性の実験を行い、臨床応用について検討した。まずヒト母乳からリゾチームの精製を行った。6人の母乳からの精製量は1Lから平均で約15mgであったが、これは過去の文献の量と比較するとかなり少ない量であった。ヒトリゾチームをニワトリリゾチームと比較したところ、未吸着状態での活性値は低かったが、吸着状態は NMR の結果よりニワトリリゾチームと同様に活性部位の反対側で吸着しており、吸着状態で抗菌活性を有している可能性が高いことが分かった。次にリゾチームの抗菌性を臨床的に検討した。一般的に臨床に用いられているグラスアイオノマー系のセメントにリゾチームを添加し、その性状を調べた。最大5%のリゾチームを添加したセメントはその物理的性質を変化させることはなかった。しかしある種の細菌に対し、抗菌性を示した。 M.Luteus に対しては非常に強い抗菌性を示した。また齲蝕原因菌の一種といわれる S.Mutans に対してもその抗菌性を確認した。しかし義歯性口内炎の原因菌といわれる C.Albicans に対して抗菌性を確認することができなかった。今回用いた抗菌性を調べる実験法は培地を利用したディスク法、吸光光度計を用いる方法であるが、詳細を調べるために今後は ATP アナライザーを用いて生菌数を調べる方法を追加しなければならないと考えている。またセメントに直接リゾチームを添加する方法では永久的なものとは考えられない。そこでセメントにリゾチームの抗体を添加し、口腔内のリゾチームをセメントに集中することで二次齲蝕を予防できる材料の開発に着手した。

从1997年的实验中，溶菌酶（酰胺组）的阳性电荷和羟基磷灰石（磷酸组）的负电荷参与吸附，这表明溶菌酶可以保留在吸附状态的抗菌特性，因为在羟基磷灰石上的吸附位点是抗细胞抗物细胞的吸附位点。为了关注这种吸附状态的抗菌特性，我们在1998年进行了抗菌实验，并检查了临床应用。首先，溶菌酶是从人类母乳中纯化的。从六种母乳中纯化的含量为1升至平均约15 mg，这明显少于以前的文献。当将人溶菌酶与鸡溶菌酶进行比较时，未吸附状态的活性值很低，但是吸附状态在活性部位的另一侧吸附，类似于鸡溶菌酶，并且发现它很可能在吸附州具有抗细菌活性。接下来，在临床上检查了溶菌酶的抗菌特性。将溶菌酶添加到玻璃离子体水泥中，该水泥通常用于临床实践，并检查了其特性。高达5％溶菌酶的水泥不会改变其物理特性。但是，已证明它是针对某些细菌的抗菌作用。它表现出针对M.Luteus的极强抗菌特性。还证实了其抗菌特性针对突变链球菌，据说这是一种引起龋齿的细菌。但是，不可能确认c.albicans的抗菌特性，据说这是牙齿牙齿炎的原因。用于研究这次使用的抗菌特性的实验方法是使用培养基和分光光度计的磁盘方法，但是为了研究细节，我们相信我们需要添加一种使用ATP分析仪检查实时细菌数量的方法。此外，直接将溶菌酶直接添加到水泥中的方法不被视为永久性。因此，我们开始开发可以通过将溶菌酶抗体添加到水泥中，并将口腔中的溶菌酶浓缩到水泥中，从而预防次要龋齿。