フェノバルビタールによる肝薬物代謝酵素遺伝子の転写活性化機構の解明

阐明苯巴比妥对肝脏药物代谢酶基因的转录激活机制

• 批准号: 09772058
• 负责人: 村山 典恵
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09772058/
• 关键词: hepatocyte; CYP2B1; フェノバルビタール; CAT; DHEA; 甲状腺ホルモン; 肝薬物代謝酵素; phenobarbital; CAT assay; thyroid hormone

ラット肝より常法に従いコラゲナーゼ潅流法を用いて、hepatocyteを調整し、48時間培養後にリン酸カルシウム法によってクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)融合CYP2Bl遺伝子を導入した。導入後直ちにフェノバルビタールを添加し誘導を開始したが、この際これまでIX10^<-6>Mでデキサメサゾン(Dex)を添加した培地を用いていた。その結果、フエノバルビタール自身による誘導効果が顕著に認められない可能性が考えられた。再度培養条件を検討した結果、誘導作用のみ減弱が期待されるハイドロコルチゾン(HC)を用いることによりフェノバルビタールによる誘導作用が著しく認められるようになった。この条件下において、CYP2Bl遺伝子5^1-非翻訳領域についてフェノバルビタールによる誘導作用との関連性を検討した。5^1-上流2.4kb以下ではフェノバルビタールによる誘導作用及びCAT活性は検出出来なかった。又、4.4kbと2.4kbを比較すると464kbではフェノバルビタール添加時と無添加時で違いが認められたCAT活性について、2.4kbでは有意な差が認められなかった。このことから、CYP2Bl遺伝子5^1-非翻訳領域のうち2.4kb付近は定常レベルのCYP2Blの発現に関与し、さらにフェノバルビタールによる誘導に関しては、それより上流域が必要であると示唆された。そこで、4.4kbのうち2.4kb付近を欠損させた遺伝子を作成し、フェノバルビタールの誘導作用について検討を行った。フェノバルビタール添加によるCAT活性の誘導については、わずかに欠損遺伝子を導入した場合に高い活性が認められた。従って定常時CYP2Blの発現の抑制的な発現調節に関与している領域として2.4kb付近が考えられた。この可能性については2.4kbと4.4kbの遺伝子を併用して導入した際、抑制的な因子の関与が減弱され、CAT活性がさらに上昇するのではないかと考え、現在検討を行っている。さらに、定常状態の発現に関連があると考えられる領域についてはin vivoの実験で抑制的な調節が認められた甲状腺ホルモン、成長ホルモン及び甲状腺ホルモンの作用と拮抗するデヒドロエピアンド口ステロン(DHFA)について、これら内分泌添加によるCAT活性の変動を比較検討している。

ラット liver より regular method に従 いコラゲナーゼ潅 flow method を いて, hepatocyte を adjustment し, にリン acid カル after 48 hours of cultureシウム法によってクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT) fusion CYP2Bl legacy 伝子を imported into した. After importing, add the しにフェノバルビタールを to induce the したが、この记これまでI X10^<-6>Mでデキサメサゾン(Dex)をaddedした平地を用いていた.そのRESULT, フエノバルビタール itself, によるinducing effect, が顕出にcognition, められないpossibility, えられた. The results of the re-culturing conditions and the expected weakening of the induction effect are the same (HC)を Use the いることによりフェノバルビタールによる inducing effect and recognize the められるようになった. Under the conditions of において, CYP2Bl remains 伝子5^1-non-translation field についてフェノバルビタールによる induction effect and との correlation を検した. 5^1-Upstream 2.4kb or less of the ではフェノバルビタールによる induction and CAT activity are released. Also, 4.4kb and 2.4kb are compared, and 464kb and 464kb are added, and there is no addition. Overtime でviolation いがcognize められたCAT active について, 2.4kb では intentional な difference がcognize められなかった.このことから、CYP2Bl 伝子5^1-无訳区のうち2.4kb Pay close to the constant レベルのCYP2Blの発appearに关与し、さらにフェノバルビタールによるinducingにIt is necessary to close the upper basin of the river and the river and show the direction of the river.そこで、4.4kbのうち2.4kbpaid nearly をowed loss させた伝子をMade of し, フェノバルビタールのinducing effect について検question を行った.フェノバルビタールAdded によるCAT active のinducing については, わずかに无伝子を introduced したoccasion にHigh いactivity がcognize められた. The regulation of the regulation of CYP2Bl's inhibitory effect at regular intervals is related to the field of study. 2.4kb pay close attention to the test.このpossibilityについては2.4kbと4.4kbの伝子を和用して Import した间、なfactor that is suppressed The clearance and weakening of CAT activity have increased, and the activity of CAT has increased.さらに、Stand-state の発 appear にrelated があると考えられる区 についてはin Inhibition of vivo's regulation of thyroid hormones, growth hormone, and thyroid gland's antagonism DHFA (DHFA) について, これらEndocrine Additive CAT Activity の変动をComparative 検検している.