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LIMキナーゼ相互作用分子の同定と細胞内情報伝達における機能解析

LIM激酶相互作用分子的鉴定及细胞内信号转导的功能分析

基本信息

批准号：
09780572
负责人：
宮本一政
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780572/
关键词：
LIMキナーゼ LIMドメイン Two IIybrid法 Axin limkain β1 YGリピート limkain β4 精子形成 LIML プロテインキナーゼ Two-Hybrid法

项目摘要

今年度の主な研究成果は以下のとおりである。1. Two Hybrid法によるLIMK相互作用分子の検索ならびに相互作用の確認:昨年度Two-Hybrid法を用いてLIMキナーゼ(LIMK)相互作用分子のスクリーニングを行った結果、既知・新規合わせて56種ものクローンを同定した。今年度はそれらの相互作用分子の中から興味あるクローンについてGST融合タンパクを用いたin vitroでの相互作用分子の確認を行った。さらに、in vitroでの相互作用が確認できたクローンのついてCOS7細胞にco-transfectionしてin vivoでの相互作用の確認を進めた。2. LIMK2とAxinの相互作用の解析:LIMK2のLIMドメインをbaitにしてとれたクローンの一つとしてAxinを同定し、その相互作用の解析を行った。Axinは1997年にWntカスケードの阻害因子として同定された分子で、Xeuopusの系で体軸の形成を阻害することが知られている。今回、LIMK2がAxinのC-末端側の領域とin vitroならびにin vivoで結合していることを確認した。さらに、LIMK2のLIMドメインはAxinのβ-カテニン結合領域とDishevelledホモログ領域の間にあるこれまでに機能が知られていなかった領域と相互作用していることを明らかにした。しかしながら、LIMK2の様々な構築をXenopus胚にマイクロインジェクションした結果、体軸形成への影響は見られずLIMK2はAxinの体軸形成以外の機能と関連しているものと推察している。3. 新規LIMK2結合蛋白質の解析:昨年度は新規の相互作用分子のうちlimkain β1と名付けた1735アミノ酸の分子の構造および発現解析を行い、そのC末端側にはYGリピートと名付けたチロシン-グリシン残基が保存されている特徴的な繰り返し構造を持っていることを明らかにした。また、limkain β1は成体ではLIMK2と同様に広い組織に発現しているが、初期胚でのin situ解析では神経系に発現が見られ神経系での機能が示唆された。今年度はさらにin vivoでの相互作用の確認、ならびに免疫染色によってlimkain β1は細胞質内に分布するすることを見い出した。また、別の新規クローンとしてLIMK2に結合するlimkain β2、limkain β4の構造および発現解析を行い、そのうちlimkain β4はLIMK2と同様に精巣特異的なバリアントを見い出し、その発現挙動がLIMK2と一致することから精子形成過程における両バリアントの機能的連携が示唆された。

This year's main research results are as follows. 1. Two Hybrid Method for Identification and Interaction of Limk Interacting Molecules: Last year, Two-Hybrid Method was used to identify 56 species of Limk Interacting Molecules. This year, the identification of interacting molecules in the GST fusion system was carried out. In addition, the interaction in vitro was confirmed. The interaction in COS7 cells was confirmed in vivo. 2. Analysis of LIMK2 and Axin Interaction: LIMK2 's LIM interface is baited and its interaction is analyzed. In 1997, Axin was able to determine the resistance factor of the Wnt and the resistance factor of the Xeuopus system. Limk2 is now confirmed in the C-terminal region of the Axin. The LIM of LIMK2 is a combination of the β-domain and the domain of the interaction. The results of the construction of Xenopus embryos and the effects of the formation of axons on the functions and relationships of LIMK2 axins. 3. Analysis of the new LIMK2 binding protein: yesterday, the new interacting molecule of Limkain β1 and its name 1735 were analyzed. The molecular structure and development of the new LIMK2 binding protein were analyzed. The C-terminal side of the new LIMK2 binding protein was analyzed. In addition, Limkain β1 is found in the early stages of the development of the nervous system. This year, the interaction in vivo was confirmed, and the distribution of limkain β1 in cytoplasm was observed. Limkain β2 and Limkain β4 are combined in the Limk2 and Limkain β4, and the structure and development of Limkain β2 and Limkain β4 are analyzed. Limkain β4 and Limk2 are combined in the Limk2 and Limk2, respectively.