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GFP発現ベクター導入・ヒト胆道癌細胞を用いた肝転移形成機序の研究

导入GFP表达载体与人胆道癌细胞肝转移形成机制研究

基本信息

批准号：
10770603
负责人：
川本徹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

平成11年度はラット由来の大腸癌細胞株2株(RCN-H4,RCN-9)と膵癌細胞株1株(ACL-15)を用いて本実験を施行した。これら3株はいずれも高転移能を有することが知られている。これら癌細胞の標識はRhodamine 6Gによる蛍光標識法を用いた。方法:RCN-H4,RCN-9,ACL-15各癌細胞株をシャーレにて1X10^8個まで培養し、Trypsin-EDTA処理により細胞浮遊液を作製した。PBSにより2回洗浄したのち、Rhodamine 6Gを30分間接触させ、シリンジ内に採取、室温保存とした。次にWister系ラット牡4週齢を麻酔下に頚静脈及び、動脈にカニュレーション、気管内挿管を行ない、開腹した。肝左葉を脱転し、門脈に27G針をカニュレーションし、癌細胞を注入した。同時にビデオにより、肝臓内における癌細胞の動態を録画した。約10分観察後、肝臓を摘出し、ホルマリン固定標本を作製し、HE染色と抗サイトケラチン19抗体を用いた免疫染色により癌細胞の同定を行なった。結果:蛍光標識された癌細胞は門脈内注入直後より、グリソン鞘から類洞内を通過し、中心静脈へと流れていった。その速さはおよそ6m/sであった。類洞内に長時間滞留した癌細胞は認められなかった。HE染色の観察では門脈内の癌細胞は認識可能であったが、類洞内の癌細胞は困難であった。抗サイトケラチン19抗体による染色では、ラット肝細胞はほとんど染色されず、胆管上皮と注入した癌細胞のみが染色された。その結果、すべての癌細胞株で、一部のグリソン鞘内門脈に癌細胞の集塊が認められた。類洞内に漏出した癌細胞は極く一部で、中心静脈内には癌細胞が散見されるのみであった。考察:人工的に注入した癌細胞は血管内皮を容易に通過することが明らかになった。また、類洞内に一部、癌細胞が滞留していたが、その部位で留まっているか否かは解明できなかった。現在、癌細胞門脈内注入後7日目の肝臓を免疫染色し、類洞内の癌細胞の分布を検討している。

Two colorectal cancer cell lines (RCN-H4,RCN-9) and one colorectal cancer cell line (ACL-15) were used in the study. The three plants are in the middle of the river. The cancer cells were identified by Rhodamine 6G and the light identification method was used. Methods:RCN-H4,RCN-9,ACL-15 cell lines were cultured in 1X10^8 medium and treated with Trypsin-EDTA. PBS, Rhodamine 6G, 30 minutes of contact time, room temperature storage The next step is to open the vein and artery at the end of the fourth week. The left lobe of the liver is removed, and the portal vein is injected with 27G. At the same time, the dynamics of cancer cells in liver tissue were recorded. After about 10 minutes of observation, the liver was extracted and fixed. The tumor cells were stained with HE and anti-tumor antibody. Results: The cancer cells were injected into portal vein and then injected into central vein.その速さはおよそ6m/sであった。Cancer cells remain in the cavity for a long time. HE staining can detect cancer cells in portal vein, but it is difficult to detect cancer cells in cavity-like vein. Anti-tumor 19 antibody staining of liver cells, bile duct epithelium and tumor cells As a result, the tumor cell lines and some of the tumor cells in the intrathecal portal were identified. Cancer cells leak out of the cavity, and cancer cells scatter in the central vein. Investigation: Artificial injected cancer cells are easy to pass through vascular endothelium. The cancer cells remain in the cave-like part of the body. 7 days after intraportal injection of cancer cells, the distribution of cancer cells in cavity-like tissues was studied.