HGF遺伝子導入によるハイブリッド型人工肝臓をめざした高密度肝細胞培養系の確立

引入HGF基因建立混合型人工肝高密度肝细胞培养体系

• 批准号: 10770629
• 负责人: 浦上 秀次郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770629/
• 关键词: 肝再生; サイトカイン; 人工肝臓; 遺伝子導入

われわれは,より高い肝細胞機能の発現とその維持を目指した遺伝子操作によるスーパー肝細胞の開発を目指している.そのため,実質肝細胞の分裂を促進する因子として肝再生時にIL-6が大きく関わるとされる報告に注目し,以下の実験を行っている.(1)実質肝細胞の培養および遺伝子導入による肝細胞機能の評価培養肝細胞には,Cell lineではヒト肝芽細胞腫株由来のHepG2およびラット肝癌細胞由来のH35,またラットの初代肝細胞を用いている.これらに,RT-PCR法により作成したhuman IL-6cDNAを挿入したプラスミドベクターを遺伝子導入した.手法としては,DNAと荷電によって結合したリポソームの細胞内への取り込みを利用して遺伝子導入するリポソーム法(lipofection)を行った.遺伝子導入による培養上清へのhuman IL-6発現をELISAにより,また遺伝子導入肝細胞の増殖能を細胞数カウント,蛋白合成能は培養上清のアルブミン測定,解毒・代謝能は培養上清へのアンモニア負荷後の濃度の経時的変化により検討した.(2)結果human IL-6cDNAを挿入したプラスミドベクターを遺伝子導入により,cell lineの細胞およびラット初代肝細胞いずれにおいてもhuman IL-6の過剰発現がELISA法による測定で認められ,正常では恒常的産生が見られない実質肝細胞からの発現が確認された.IL-6遺伝子導入においてコントロール群より増殖能,蛋白合成能は低下する傾向が見られたが,アンモニア濃度が低値で遷延する傾向が見られ,解毒・代謝能に関しては機能の亢進が示唆された.(3)今後の展望IL-6遺伝子を発現する組み換えアデノウイルスの作成を行い,リポソーム法と併せて上記実験を施行する予定である.またアミノ酸代謝へのIL-6の関与についても検討する.さらに,非実質肝細胞への遺伝子導入,ならびにこれと肝細胞とのcocultureを考えている.

High わ れ わ れ は, よ り い liver cell function の 発 now と そ の maintain を refers し た heritage 伝 sub operations に よ る ス ー パ ー hepatocellular の open 発 を refers し て い る. そ の た め, be mass hepatocellular の division を promote す る factor と し て liver regeneration に IL - 6 big が き く masato わ る と さ れ に attention し る report, the following の be 験 を line っ て い る. (1) to be の mass hepatocytes お よ び posthumous son 伝 import に よ function の review 価 る hepatocytes hepatocellular に は, Cell line で は ヒ ト liver bud cells swollen plant origin の HepG2 お よ び ラ ッ ト liver cancer Cell origin の H35, ま た ラ ッ ト の を original liver cells with い て い る. こ れ ら に, rt-pcr method に よ り made し た human The IL-6cDNAを insert the たプラス たプラス ドベ <s:1> タ タ を を progeny 伝 insert into the た. Gimmick と し て は, DNA と charged に よ っ て combining し た リ ポ ソ ー ム の intracellular へ の take り 込 み を using し て heritage 伝 son import す る リ ポ ソ ー ム method (lipofection) line を っ た. The 伝 seed is introduced into による to culture the supernatant へ 伝 human IL - 6 発 now を ELISA に よ り, ま た heritage 伝 child can count を cells into liver cells の raised colonization カ ウ ン ト, protein synthesis can は culture supernatant の ア ル ブ ミ ン determination, detoxification, metabolic energy は culture supernatant へ の ア ン モ ニ ア の concentration after load の 経 when variations of に よ り beg し 検 た. (2) the results of the human IL - 6 cdna を scions into し た プ ラ ス ミ ド ベ ク タ ー を posthumous son 伝 import に よ り, cell line の cells お よ び ラ ッ ト original liver cell い ず れ に お い て も human IL - 6 の before turning 発 が ELISA method now に よ る determination で recognize め ら れ, normal で は constant generate が see ら れ な い be mass hepatocellular か ら の 発 が now confirmed さ れ た. Traces of IL - 6 伝 son import に お い て コ ン ト ロ ー ル group よ り rights can yield, low protein synthesis can は す る tend to see が ら れ た が, ア ン モ ニ ア defer of low concentration が numerical で す る To see が ら れ, detoxification, metabolic energy に masato し て の は function hyperfunction が in stopping さ れ た. (3) the future の outlook traces of IL - 6 伝 son を 発 now す み る group in え ア デ ノ ウ イ ル ス の を い, consummate リ ポ ソ ー ム と and せ て written be 験 を imposed す る designated で あ る. ま た ア ミ ノ acid metabolism へ の IL - 6 の masato and に つ い て も beg す 検 る. さ ら に, not be qualitative liver cell へ の heritage 伝 import, な ら び に こ れ と hepatocellular と の coculture を exam え て い る.