新しい遺伝子修復活性の測定方法の開発と悪性脳腫瘍の治療への応用

基因修复活性测定新方法的开发及其在恶性脑肿瘤治疗中的应用

• 批准号: 10770700
• 负责人: 岩崎 弘充
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770700/
• 关键词: 遺伝子修復能; PCR; 遺伝子修復能測定法; ラット

培責細胞に対する過酸化水素のよる遺伝子の損傷がPCRにより測定されることがF.MICHAEL YAKESとBENNETT VAN HOUTENにより報告されています(Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.94,pp.514-519,1997)。これを応用し、障害された遺伝子はPCRにより増幅されないけれど、それが修復された遺伝子はPCRにより増幅されるようになることを利用した遺伝子修復活性の測定方法を確立することが出来ました。このアッセイはマクログロブリンのcDNAをPCRのテンプレートとして、in vitroでの除去修復能の有無を険出できます。さらにライトサイクラーシステムによる定量的PCRを導入し、定量化を試みています。次にラツトの肝臓からDNA-セルロース アフィニティー カラムとイオン交換カラムとゲル濾過カラムによるクロマトグラフィーを行いました。それぞれのカラムクロマトグラフィーの分画をアッセイしながら精製を行いました。そして除去機能を有する単一ピークの分画をSDS-ポリアクリルアミド電気泳動を行い、銀染色で5OKDaの単一バンドのタンパクを精製することができました。現在このタパクの精製を繰り返し行っています。そして集めたサンプルを用いてN末端のアミノ酸配列を決定しつつあります。一方、抗血清の作成は抗体価の上昇が不十分ですのでスケールアップを行なっています。

The PCR assay for DNA damage caused by hyperacidified water in cultured cells was reported by F.MICHAEL YAKES and BENNETT VAN HOUTEN (Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol. 94, pp. 514 - 519, 1997). The method for determining the activity of DNA repair was established. The cDNA of this gene was amplified by PCR and the presence or absence of DNA repair in vitro. Quantitative PCR is introduced into the system. The next step is to remove the DNA from the tissue and remove it from the tissue. The design of the painting is very simple. For example, the function of removing the dye is to separate the dye from the dye by SDS-sorting, electrokinetic staining, and refining the dye by 50KDa. Now we're going to have to go back. The N-terminal acid sequence is determined by the number of samples collected. One side, the antiserum production antibody rise is not very high, and the other side, the antiserum production is very high.