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成体マウスの坐骨神経移植による網膜神経節細胞軸索の再生促進の研究

坐骨神经移植促进成年小鼠视网膜神经节细胞轴突再生的研究

基本信息

批准号：
10770931
负责人：
井上徹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)正常マウス(C57BL/6J)で、末梢神経を自家移植する方法および網膜神経節細胞の軸索再生能を定量的に評価する方法を確立した。網膜内移植法および眼窩内移植法を試み、移植神経片からの逆行性標識法によって、いづれの方法でも軸索再生細胞を確認した。軸索再生能の定量的評価によって、網膜内移植法では平均1%、眼窩内移植法では0.1%と前者の方が10倍も再生率が高いことが分かった(Inoue et al.,2000)。(2)正常マウスで網膜を培養し、網膜神経節細胞へLucifer yellowを細胞内注入した。その樹状突起の形態は、ネコのα-cell、γ-cellまたはδ-cellに類似し、ラットでの形態的分類に対応していた。(3)Bcl-2トランスジェニック(bcl-2Tg)マウスへ末梢神経移植を行い、網膜神経節細胞の軸索再生能を定量的に評価した。健常の神経節細胞、眼窩内移植後の生存細胞および移植後に軸索再生した神経節細胞の細胞数を求め、そこから生存率、生存細胞の軸索再生率および健常細胞の軸索再生率を評価した。その結果、移植4週後の平均生存率はbcl-2Tgマウスでは64.1%で、、これは野生型マウスの9.6%に比べ約7倍も高かった。しかし、生存細胞の平均軸索再生率は前者で0.5%であり、後者の4.6%に比べ著しく低かった。その結果、健常細胞の平均軸索再生率は両マウス間で有為差がなかった(0.3%vs0.4%)。しかし免疫組織染色により、眼窩内移植した神経片の前で、一部の軸索伸展が妨げられることが分かった。そこで、そのような制限のない網膜内移植によって検討したところ、軸索再生率は両マウスとも増加したが、bcl-2Tgマウスでの再生率は有為に増加していなかった(0.9%vs1.3%)。以上より、強制発現されたbcl-2は軸索切断された成熟網膜神経節細胞の生存を促進するが、軸索再生には関与していないことが強く示唆された(投稿中)。

(1)Methods of autotransplantation of normal neurons (C57BL/6J) and quantitative evaluation of axonal regeneration of retinal ganglion cells were established. The method of transplantation in retina and orbit was tested, and the method of retrograde labeling was used to confirm axonal regeneration. The quantitative evaluation of axonal regeneration ability showed that the average regeneration rate was 1% for intraomental transplantation and 0.1% for intraorbital transplantation (Inoue et al., 2000)。(2)Normal retinal cells were cultured and injected with Lucifer yellow. The morphology of dendrites is related to the classification of α-cell, γ-cell and δ-cell. (3)Bcl-2 receptor (bcl-2Tg) was used to quantitatively evaluate axonal regeneration of retinal ganglion cells. Healthy ganglion cells, survival cells after orbital transplantation, axonal regeneration after transplantation, cell count, survival rate, axonal regeneration rate of healthy ganglion cells were evaluated. Results: The average survival rate of bcl-2Tg was 64.1% at 4 weeks after transplantation, and that of bcl-2Tg was 9.6% at 4 weeks after transplantation, which was 7 times higher than that of bcl-2 Tg. The average axonal regeneration rate of survival cells was 0.5% and 4.6% respectively. The average axonal regeneration rate of healthy cells varied from 0.3% to 0.4%. Immunohistochemical staining, intraorbital transplantation, and axonal extension The regeneration rate of axons increased significantly (0.9% vs 1.3%). The above stress expression was found in bcl-2, which promoted the survival of mature retinal ganglion cells after axonal transection, and the relationship between axonal regeneration and stress expression was strongly indicated (submission in progress).