成体マウスの坐骨神経移植による網膜神経節細胞軸索の再生促進の研究

坐骨神经移植促进成年小鼠视网膜神经节细胞轴突再生的研究

• 批准号: 10770931
• 负责人: 井上 徹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770931/
• 关键词: 軸索再生; 末梢神経移植; 網膜神経節細胞; bcl-2; トランスジェニックマウス; 網膜; 視神経; 軸策; 再生; 坐骨神経; 移植; 細胞内注入; bcl-2トランスジェニックマウス

(1)正常マウス(C57BL/6J)で、末梢神経を自家移植する方法および網膜神経節細胞の軸索再生能を定量的に評価する方法を確立した。網膜内移植法および眼窩内移植法を試み、移植神経片からの逆行性標識法によって、いづれの方法でも軸索再生細胞を確認した。軸索再生能の定量的評価によって、網膜内移植法では平均1%、眼窩内移植法では0.1%と前者の方が10倍も再生率が高いことが分かった(Inoue et al.,2000)。(2)正常マウスで網膜を培養し、網膜神経節細胞へLucifer yellowを細胞内注入した。その樹状突起の形態は、ネコのα-cell、γ-cellまたはδ-cellに類似し、ラットでの形態的分類に対応していた。(3)Bcl-2トランスジェニック(bcl-2Tg)マウスへ末梢神経移植を行い、網膜神経節細胞の軸索再生能を定量的に評価した。健常の神経節細胞、眼窩内移植後の生存細胞および移植後に軸索再生した神経節細胞の細胞数を求め、そこから生存率、生存細胞の軸索再生率および健常細胞の軸索再生率を評価した。その結果、移植4週後の平均生存率はbcl-2Tgマウスでは64.1%で、、これは野生型マウスの9.6%に比べ約7倍も高かった。しかし、生存細胞の平均軸索再生率は前者で0.5%であり、後者の4.6%に比べ著しく低かった。その結果、健常細胞の平均軸索再生率は両マウス間で有為差がなかった(0.3%vs0.4%)。しかし免疫組織染色により、眼窩内移植した神経片の前で、一部の軸索伸展が妨げられることが分かった。そこで、そのような制限のない網膜内移植によって検討したところ、軸索再生率は両マウスとも増加したが、bcl-2Tgマウスでの再生率は有為に増加していなかった(0.9%vs1.3%)。以上より、強制発現されたbcl-2は軸索切断された成熟網膜神経節細胞の生存を促進するが、軸索再生には関与していないことが強く示唆された(投稿中)。

（1）我们已经建立了一种在正常小鼠（C57BL/6J）中自体外神经的方法，以及一种定量评估视网膜神经节细胞的轴突再生潜力的方法。尝试尝试使用视野内和肌内植入方法，并通过从植入的神经片段中逆行标记来使用任何一种方法确认轴突再生细胞。轴突再生能力的定量评估表明，前者的平均植入植入平均增加了1％，而在眶内植入的平均增加为0.1％（Inoue等，2000）。 （2）在正常小鼠中培养视网膜，细胞内注入路西法黄色。树突形态类似于CATα细胞，γ细胞或δ细胞，对应于大鼠的形态学分类。 （3）在Bcl-2转基因（BCL-2TG）小鼠上进行周围神经移植，以定量评估视网膜神经节细胞的轴突再生潜力。确定了健康神经节细胞的数量，肌内植入后的活细胞以及植入后再生轴突的神经节细胞，并评估了健康细胞的存活率，活性细胞的轴突再生速率以及健康细胞的轴突再生速率。结果表明，在BCL-2TG小鼠中，移植4周后的平均存活率为64.1％，野生型小鼠的平均生存率大于9.6％的7倍。但是，前者的平均轴突再生率为0.5％，明显低于后者4.6％。结果，两只小鼠之间健康细胞的平均轴突再生率没有显着差异（0.3％比0.4％）。然而，免疫组织化学染色表明，在植入轨道内植入的神经片段前可以防止某些轴突延伸。因此，当我们研究这种情况没有这种局限性时，两只小鼠的轴突再生率都会提高，但是Bcl-2TG小鼠的再生率并未显着增加（0.9％比1.3％）。从以上，强烈建议强制表达的Bcl-2促进了轴突切开术成熟的视网膜神经节细胞的存活，但不参与轴突再生（邮政）。

项目成果

Inoue T.,Sasaki H.,Hosokawa M.and Fukuda Y.: "Axonal regeneration of retinal ganglion cells by perpheral nerve transplantation in adult mice: a quantative study"Restorative Neurology and Neuroscience. (in press).

Inoue T.、Sasaki H.、Hosokawa M.和 Fukuda Y.：“成年小鼠周围神经移植视网膜神经节细胞的轴突再生：一项定量研究”恢复神经学和神经科学。