培養骨芽細胞様株細胞における骨基質タンパク遺伝子発現の多様性について

培养的成骨样细胞中骨基质蛋白基因表达的多样性

• 批准号: 10770999
• 负责人: 神谷 直子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770999/
• 关键词: 骨芽細胞; 培養; alkaline phosphatase; bone sialoprotein; osteopontin; osteocalcin; decorin; biglycan; proteoglycan

平成11年度は,骨芽細胞様株細胞C20およびC26細胞を用い,以下の検討を行った。【方法】C26およびC20細胞を1〜14日間にわたってそれぞれ培養した後,経日的に細胞を回収した。これらの細胞からRNAを抽出し,[α-^<32>P]dCTPで標識したラットosteopontin(OPN),bone sialoprotein(BSP),osteocalcin(OC),alkaline phosphatase(ALP)cDNAプローブを用い,これらのタンパクのmRNAの発現をNorthern blot法を用いて分析した。この方法で検出できないものについては,RT-PCR法でその発現を確認した。【成績】C26およびC20細胞は培養6日目にほぼconfluentに達した。OPN mRNAは,両細胞において同様で,培養1日目から発現し,以後一定な発現を示した。ALP mRNAは,C26細胞では培養2日目から発現し,8日目までやや増加し,以後一定な発現を示したが,C20細胞においては,1日目から発現し,9日目までやや強度な増加傾向を示し,以後一定な発現を示した。なお,Northern blot法では,両細胞ともにOCとBSPのmRNA発現を検出できなかったが,RT-PCR法でOCの遺伝子発現のみを確認することができた。【考察および結論】平成10年度の検討では,前骨芽細胞から骨芽細胞へ分化するとともにdecorinの遺伝子発現は顕著に低下するが,biglycanはほぼ一定の発現を示すことを示した。平成11年度ではALPのmRNA発現は細胞分化とともに遺伝子・タンパクレベルで増加するが,OPN mRNAは前骨芽細胞および骨芽細胞の両細胞においてほぼ同様の発現を示し,培養日数による変化も示さないことを明らかにした。しかしながら,in vivoにて成熟骨芽細胞に発現するOCとBSP mRNAは両細胞においてNorthern blot法の検出感度以下で,発現の違いを確認することができなかった。これらの結果より,biglycanとOPNは前骨芽細胞および骨芽細胞の機能発現に重要な役目を果たしていると考えられた。なお,これらの結果については論文発表を準備中である。本研究に関連する論文(2報)を平成11年度に発表した。

In Heisei 11, bone bud cell line C20 and C26 cells were used, and the following discussion was carried out. [Method] C26 and C20 cells were cultured from 1 to 14 days, and then returned to normal. The <32>expression of mRNA in these cells was analyzed by Northern blot.[α-^ P]dCTP was used to identify osteopontin(OPN),bone sialoprotein(BSP),osteocalcin(OC),alkaline phosphatase(ALP)cDNA. This method was used to detect and confirm the presence of DNA by RT-PCR. C26 and C20 cells were cultured for 6 days and reached confluent levels. OPN mRNA was expressed in the same way as in the cells, and it was observed after 1 day of culture. ALP mRNA was detected in C26 cells at day 2, increased at day 8, and then definitely detected in C20 cells at day 1, increased at day 9, and then definitely detected in C26 cells. Northern blot method was used to detect the mRNA expression of OC and BSP,RT-PCR method was used to confirm the mRNA expression of OC. [Conclusion] The results of the 10-year review show that the development of decorin gene in pre-osteoblast differentiation and osteoblast differentiation is lower than that of biglycan. In Heisei 11, ALP mRNA expression increased in cell differentiation,OPN mRNA expression increased in pre-osteoblast cells and osteoblast cells, and OPN mRNA expression increased in culture days. The expression of OC and BSP mRNA in mature bone bud cells in vivo was confirmed by Northern blot. The results show that biglycan OPN is important for the development of bone bud cells and bone bud cells. In preparation for the publication of the paper, the results of the paper are presented. This research is related to the paper (2 reports) published in the 11th year.

项目成果

Yamada,T.,Kamiya,N. et al.: "Effects of transforming growth factor-β1 on the gene expression of decorin, biglycan, and alkaline phosphatase in osteoblast precursor cells and more differentiated ostepblast cells."Histochem. J.. 31・10. 687-694 (1999)

Yamada, T., Kamiya, N. 等人：“转化生长因子-β1 对成骨细胞前体细胞和更多分化的成骨细胞中核心蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖和碱性磷酸酶基因表达的影响。”Histochem J.. 31・10。687-694（1999）

Takagi,M.,Kamiya,N. et al.: "Effects of bone morphogenetic protein-2 and transforming growth factor-β1 on gene expression of decorin and biglycan by cultured osteoblastic cells."Histochem. J.. 31・6. 403-409 (1999)

Takagi, M., Kamiya, N. 等：“骨形态发生蛋白-2 和转化生长因子-β1 对培养的成骨细胞核心蛋白聚糖和双糖链蛋白聚糖基因表达的影响。”Histochem J.. 31・6。 -409 (1999)