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胚に特異的な糖鎖を生合成するフコース転移酵素の遺伝子クローニングと発現部位の検索

岩藻糖基转移酶的基因克隆和表达位点搜索，生物合成胚胎特异性糖链

基本信息

批准号：
10780368
负责人：
長束俊治
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto Institute of Technology (1999)Osaka University (1998)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に遺伝子の単離を行った2種類のゼブラフィッシュフコース転移酵素の基質特異性を解析した。発現ベクターに組み込んだ遺伝子を培養細胞に導入し、酵素を発現させた後、紬胞を溶解して酵素元とした。基質として1型構造糖鎖、2型構造糖鎖、シアル酸の付いた2型構造糖鎖を用いたところ、2型構造糖鎖のみにフコースを転移した。この基質特異性は、脊椎動物の胚における存在が酵素学的な研究から指摘されているフコース転移酵素と一致している。前年度に示した本酵素遺伝子の胚における特異的な発現と合わせて、我々がクローニングした遺伝子は、以前より多くの糖鎖研究者によって探し求められてきた、胚特異的ルイスx糖鎖を生合成するフコース転移酵素であることが強く示唆された。胚特異的ルイスx糖鎖は、特に神経外胚葉に強く発現しており、神経系の発生に重要な役割を果たしていることが示唆されている。現在、本酵素遺伝子の詳細な発現部位の特定を目指して、in situハイブリダイゼーション法による分析を行っている。次に、本酵素によって生合成されて胚細胞で発現している糖鎖の構造解析を目的として、ゼブラフィッシュ胚で特異的に発現しているフコシルオリゴ糖鎖の検索を行った。N-配糖体とO-配糖体をともにピリジルアミノ化による2次元マッピング法で展開し、フコシダーゼ消化と組み合わせてスクリーニングしたところ、O-配糖体の9グルコース単位の画分にフコース転移酵素の発現時期と一致して発現しているフコシルオリゴ糖鎖を確認できた。

In the past year, two kinds of enzymes have been analyzed for their substrate specificity. The enzyme is introduced into the culture cells and dissolved in the cells after the enzyme is produced. The structure of the matrix sugar lock type 1, type 2 sugar lock type 2 sugar lock type 2 sugar lock The substrate specificity of the vertebrate embryo was investigated by enzymology. In the past year, we have shown that there is a specific discovery and synthesis of this enzyme gene. Many sugar lock researchers in the past have been trying to find out how to synthesize this enzyme gene. Embryo specific glycogen lock, especially in the development of neuroectoderm, important for the development of neurogenesis. Now, the enzyme gene in detail to develop site specific analysis, in situ analysis of the process This enzyme is responsible for the synthesis of glycogen in embryonic cells, and for the structural analysis of glycogen in embryonic cells. N-Glycosides and O-Glycosides are the most common forms of N-Glycosides. The N-Glycosides and O-Glycosides are the most common forms of N-Glycosides.