遺伝子発現誘導システムを利用したミッドカインシグナル伝達機構の解明

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1.MKはスルファチドに特異的に結合し細胞接着を促進するミッドカイン(MK)の作用機序を明らかにする為、まずMKの細胞成分に対する結合を調べた。固相化糖脂質に対する^<125>I標識MKの結合実験、固相化MKに対する糖脂質含有リポソームの結合実験、培養細胞に対する^<125>I標識MKの結合実験から、MKは硫酸含有糖脂質であるスルファチドに特異的に結合することが明らかになった。^<125>I標識MKのスルファチドに対する解離定数は約5〜10nM^<-1>でヘパラン硫酸プロテオグリカンに比べ約5〜10倍の高であった。またスルファチドを膜表面に取り込ませた細胞は、MKをコートしたディスク上に接着した。2.PTNノックアウトマウス作成MKには、アミノ酸レベルで約60%の相同性を有するPTNと呼ばれるタンパク質が存在する。これら2つのタンパク質は、非常に類似した生物活性を示すため、MKのシグナル伝達機構を明らかにするため、MK,PTNともに発現が認められない細胞株、もしくは動物を作り出す必要が生じた。そこで平成10-11年でPTNノックアウトマウスの作成を試みた。PTN遺伝子のエクソン2及び3をネオマイシン耐性遺伝子に置換した2種類のターゲッティングベクターを作成し、これらベクターをES細胞に導入することでPTNノックアウトマウスを作成した。現在C57BL6・Jマウスとの戻し交配を行っている。