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DNA凝縮を制御するためのパラメーター設定に関する基礎研究

控制DNA凝聚的参数设置基础研究

基本信息

批准号：
10780408
负责人：
松澤有希子
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Toyohashi University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子工学において、DNA凝縮はDNAのマニピュレーションや効率的な遺伝子導入をもたらす上で重要な構造体であると考えられる。そのためには、DNA凝縮に関する物理化学的なメカニズムを理解する必要がある。本研究では、2年の間に以下のような結果を報告したのでここに記す。1)酵母のゲノムサイズのDNAでも容易に安定なグロビュールを作成することが分かった。1本のDNA上に数個の凝縮ができたものと考えられるが、この構造は安定であり、応力をかけても電気泳動で長さの確認をした結果断片化されていないことが明かとなった。2)DNA凝縮体を1064nmの波長を持つレーザーでトラップすることが可能であることを明らかにした。3)様々な凝縮剤(PEG-MgCl2、スペルミジン、カチオン性界面活性剤)により形成されたDNAの凝縮体は、それぞれレーザーによるトラップ力が異なることが分かった。4)DNAの長さによってグロビュールの大きさが変わり、さらに、1064nmの波長を持つレーザーでトラップしたとき、長さとトラップ力の間には比例関係があることが分かった。5)溶液中の条件を調節すれば、短いDNAでも1つの凝縮体を形成したり、また何分子も集まって数珠状になることが分かった。主な原因は、水溶液中の塩濃度によるものであることが示唆される。6)レーザーにより2つのグロビュール(PEG-MgCl2、スペルミジンにより引き起こした)をいったん重ねるとレーザー光をカットした後も離れず溶液中を漂うことが分かった。このことから、グロビュール間には引き合う力があり、DNAの対イオンがDNAの電荷の遮蔽のために分散化する傾向があり、DNAの濃度を高めたときに生じる凝集の原因だと考えられる。

DNA condensation and DNA synthesis are important components of gene engineering. The physical and chemical aspects of DNA condensation are essential to understanding. The results of this study are reported in the following two years. 1)Yeast DNA is easy to stabilize and produce. 1. Several condensation sites on the DNA were identified, and the structure was stable. 2)DNA condensates at wavelengths of 1064nm are likely to be isolated. 3) Condensation agent (PEG-MgCl2, PEG-MgCl2) 4) The length of DNA is different from the wavelength of 1064 nm. 5)The conditions in the solution are regulated, and the condensed body of short DNA is formed, and the molecules are collected into beads. The main reason is that the concentration of arsenic in the aqueous solution is different. 6) The reason for DNA aggregation is that DNA concentration tends to be high.