出芽酵母の遺伝子相同的組換えの生化学的研究

酿酒酵母基因同源重组的生化研究

• 批准号: 10780426
• 负责人: 新井 直人
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780426/
• 关键词: 相同的組換え; 相同的対合; 出芽酵母; Rad51; RecA; ATPase; DNA; 生化学; 遺伝子; D-loop

遺伝子相同的組換えにおいて、互いに相同なDNAを探して対合させる相同的対合の過程で、中心的役割を担っている蛋白は、出芽酵母Rad51である。Rad51だけでは相同的対合活性が弱いため、活性促進因子の一つであるRad54を大腸菌で発現精製することを試みたが、困難を極め、現在出芽酵母を用いて着手している。一方、Rad51による相同的対合活性が弱い原因を知るために、単独で強い活性を示す大腸菌RecAとの生化学的性質の比較を試みた。RecAとRad51の間の相違点であるDNAへの結合性に着目し、DNA依存性ATPase(DNA-ATPase)活性の変化から検討した。Rad51のdsDNA-ATPase活性は、RacAと同様にssDNA-ATPaseの約1/5であった。しかし、ssDNAとdsDNAが共に存在する場合でのATPase活性は、RecAがssDNA-ATPase活性と同一であったのに対し、Rad51ではssDNA-ATPaseとdsDNA-ATPaseの中間の活性を示し、ssDNAとdsDNAの濃度比に依存し、ATPase活性も変化した。これらの結果から、RecAがssDNAに優先的に結合するのに対し、Rad51はssDNAとdsDNAの区別なく結合し、どちらに結合するかは両者の濃度比によることが示唆された。さらに、一度ssDNAまたはdsDNAに結合したRad51もDNAから遊離するとssDNAとdsDNAの区別なく両方に結合することを示唆する結果も得た。これまでに他の研究グループにより、dsDNAとRad51の結合が相同的対合を阻害することが示唆されていることから、最初にssDNAとRad51を結合させても、ssDNAから遊離したRad51がdsDNAに結合することがRad51による相同的対合活性の弱い原因で考えられる(論文投稿準備中)。

The same DNA sequence was detected in the same DNA sequence, and the same DNA sequence was detected in the same DNA sequence, and the same DNA sequence was detected in the same DNA sequence. Rad51 has the same binding activity as Rad54, and the activity promoter has the same binding activity as Rad54. A comparison of the biochemical properties of E. coli RecA was made between the two groups with the same binding activity. RecA and Rad51 have been found to be incompatible with DNA binding and DNA-dependent ATPase activity. Rad51 dsDNA-ATPase activity is about 1/5 of RacA's. When ssDNA and dsDNA are present together, ATPase activity is dependent on the concentration ratio of ssDNA and dsDNA, and ATPase activity is dependent on the concentration ratio of ssDNA and dsDNA. The result is that RecA binds preferentially to ssDNA, Rad51 binds preferentially to dsDNA, and Rad51 binds preferentially to dsDNA. For example, if a ssDNA is present, it can bind to a dsDNA fragment. In this study, the binding of dsDNA to Rad51 was inhibited by the same binding activity. In the beginning, the binding of ssDNA to Rad 51 was inhibited by the same binding activity of dsDNA to Rad51. The reasons for the weak binding activity of ssDNA to Rad 51 were examined (in preparation for submission).