ラット胎仔脳に発現する遺伝子M1の海馬采−脳弓系形成過程における機能解析

胎鼠脑中表达的基因M1在海马穹窿系统形成过程中的功能分析

• 批准号: 10780505
• 负责人: 畠中 由美子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780505/
• 关键词: 神経発生; 海馬; 領域特異的; 海馬采; グリア細胞

前脳の形態形成のメカニズムを解析する目的で発生期のラット終脳から領域特異的に発現する遺伝子を検索し、M1遺伝子を得た。この遺伝子は海馬原基のうち最も腹側の海馬采の位置で発現している。このM1遺伝子の機能を調べるため、本年度はペプチド抗体によるM1蛋白質の分布の解析、M1蛋白質発現CHO細胞の樹立、全長M1蛋白質に対するポリクローナル抗体の作成および機能中和モノクローナル抗体作成を試みた。ペプチド抗体でその分布を調べると、M1蛋白質は、胎生12日から海馬原基の細胞膜で発現が認められた。M1発現細胞は非神経細胞であり、radial gliaのマーカーであるネスチン抗体で陽性になることから、radial gliaのsubtypeと考えられた。また、その免疫反応は神経管表層に長く伸びるendfeetに強く、これと接する海馬神経細胞との相互作用が考えられた。海馬采が形成されていく過程で、免疫陽性像は海馬采にも観察されるようになった。M1を安定に発現するCHO細胞の上で、海馬神経細胞を培養したところ、コントロールのCHO細胞に比べ、神経細胞の生存率と神経突起の伸びがよくなる傾向がみられたが、まだ結論には至っていない。大腸菌発現系では、チオレドキシンを利用することにより可溶性グルタチオンSトランスフェラーゼ融合M1蛋白質を得ることに成功したが、回収量が微量であった。ウサギに免疫してポリクローナル抗体を作成することは断念し、モノクローナル抗体作成にしぼって組換えM1蛋白質および、M1発現CHO細胞をマウスに免疫する抗体作成を試みたが、いずれも作出には至らなかった。抗体による機能解析は難しいと判断し、M1を神経管全体に異所的に発現させ、海馬采一脳弓系形成への影響を解析することにした。現在ネスチンのプロモーター下にM1遺伝子をつないだ構築系でトランスジェニックマウスを作成中である。

The purpose of the analysis of the morphology of the former is to detect the occurrence of domain-specific genes and to obtain M1 genes. The hippocampus primordium of the hippocampus is located in the ventral part of the hippocampus. This year, we will analyze the distribution of M1 protein, establish CHO cells for M1 protein production, prepare antibodies for full-length M1 protein, and conduct functional neutralization of M1 protein antibodies. The distribution of M1 protein in hippocampus was regulated by the expression of M1 protein in hippocampus on the 12th day of birth. M1 developing cells are non-neuronal cells, radial glia subtype, and antibody positive. The interaction between hippocampal neurons and immune responses is investigated. Hippocampus formation process, immunopositive image of hippocampus detection process. M1 stability development in CHO cells, hippocampus cells culture, brain cell survival rate, brain processes and the tendency to change, conclusions to the middle. Escherichia coli production system is successful in obtaining soluble M1 protein, and the recovery amount is very small. It is necessary to prepare the antibody for M1 protein and M1 CHO cells, so as to prepare the antibody for M1 protein. The function analysis of antibody is difficult to determine, the occurrence of M1 in the whole brain, and the analysis of the influence of hippocampus formation. Now, the M1 gene is constructed in the middle of the system.

项目成果

K.Uemura et al.: "Neural Development “Proceedings of the second symposium of the Keio University International Symposia for Life Sciences and Medicine"" Springer-Verlag Tokyo, 544 (1999)

K. Uemura 等人：“神经发育“庆应义塾大学生命科学与医学国际研讨会第二次研讨会论文集”” Springer-Verlag Tokyo，544 (1999)

Yumiko Hatanaka: "Early Region-Specific Gene Expression during Tract Formation in the Embryonic Rat Forebrain" J.Comp.Neurol.395. 296-309 (1998)

Yumiko Hatanaka：“胚胎大鼠前脑束形成过程中的早期区域特异性基因表达”J.Comp.Neurol.395。