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DNAマイクロアレイ技術を用いた神経細胞移動を制御する分子の探索

使用 DNA 微阵列技术寻找控制神经元迁移的分子

基本信息

批准号：
17024007
负责人：
畠中由美子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

発生過程において、最終分裂を終えた神経細胞は機能部位まで移動する。本研究は、大脳皮質の錐体細胞を対象に、神経細胞の移動・停止過程に関与する細胞間相互作用を明らかにするため、移動錐体細胞と停止錐体細胞の比較に焦点を置き、これらの細胞間で発現量が異なる膜蛋白質・分泌性蛋白質を網羅的に探索・同定することを目的として実験を行った。移動錐体細胞は、マウス胎生15日の脳室帯にgfp-plasmidを子宮内電気穿孔法用いて導入し、4日後(生後0日)の皮質板組織から調製した。これと対になる停止錐体細胞は、同手順を経て5日後(生後1日)の辺縁帯を含む組織から調製した。組織片は、酵素処理によって単一細胞に分散後、propidium iodide(PI)処理を行い、GFP陽性/PI陰性細胞となる生細胞のみをセルソータで回収した。細胞より回収したRNAはバイオアナライザーで品質の評価を行った。一連の実験により、約5x10^4個のGFP陽性細胞から品質の良いRNAを回収する条件が確立し、最終的に移動錐体細胞と停止錐体細胞に関して、各3サンプルのRNAを調製した。得られたRNAをもとにプローブを作成し、Affymetrix社のMouse Expression Array 430Aを使い、DNAマイクロアレイ法で発現を解析した。各サンプル中の発現遺伝子は、シグナル強度を基に同定した。更に移動細胞および停止細胞に含まれる各発現遺伝子を、シグナル強度をもとにGenespring解析ソフトウエアを用いて統計的に処理し、両者に数倍以上差のあるものを抽出した。今後は、抽出遺伝子のうち膜蛋白質、分泌性蛋白質をコードすると予想される遺伝子を選択して発現の確認をin situ hybridization法を用いて行うとともに、これら遺伝子が神経細胞移動において果たす役割を解明する実験へと発展させる予定である。

During the development process, the final division of the brain cell moves to the functional site. This study aims to explore the relationship between cellular interactions and the migration and deactivation of neurons in cortical pyramidal cells, and to explore the relationship between cellular interactions and the migration and deactivation of neurons. The cortical plate tissue of the 15-day-old embryo was modulated by intrauterine electroporation. 5 days after birth (1 day after birth), the pyramidal cells were isolated and modulated. Tissue slides, enzyme treatment, dispersion of cells, propidium iodide(PI) treatment, GFP positive/PI negative cells, and recovery of cells Cell phone calls, RNA calls, quality calls. In a row, about 5x10^4 GFP-positive cells were found to have good quality RNA, and finally 3 cells were found to have RNA modulation. The Mouse Expression Array 430A of Affytrix was created and analyzed by DNA sequencing. The intensity of each occurrence is determined equally. In addition, the mobile cell and the stationary cell contain different gene expression, gene expression intensity and gene expression analysis software. In the future, we will select the expected membrane proteins and secretory proteins from the extracted genes and use the site hybridization method to confirm the discovery. It is expected that the actual and development of these genes will be clarified and the role of genes in the movement of neurons will be further clarified.