遺伝子操作動物に形成された腫瘍のCGH法によるゲノム異常領域の検索

使用 CGH 方法在基因工程动物形成的肿瘤中寻找基因组异常区域

• 批准号: 10780518
• 负责人: 渡邊 夕香
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Central Institute for Experimental Animals
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780518/
• 关键词: CGH; rasH2マウス; ヒトプロト型c-Ha-ras遺伝子; mitoindex; FISH; BAC clone

がん原物質に対して高感受性を示すヒトプロト型c-Ha-ras遺伝子を導入したrasH2マウスに形成された腫瘍について、COH(Comparative genomic hybridization)法を用いてゲノム異常領域のスクリーニング方法を確立し、rasH2マウスに形成された腫瘍のゲノム異常領域を探索することを目的として本研究を行った。マウスの牌細胞培養および染色体標本作製の条件を検討した。牌細胞回収後、ConA、LPS、PHAを組み合わせて培養し、mitoindexの高いサンプルを得ることができた。また、低張処理の時間や温度を検討して、良好な染色体標本を作製した。腫瘍組織および正常組織由来のDNAの標識においては、CGH法に適しているサイズになる条件を決定した。また、良好なCGH解析を行えるようにするため、腫瘍組織および正常組織由来DNAプローブを標識した蛍光物質の特徴を考慮して、各々の濃度を決定した。マウス染色体では各染色体の大きさが均一で同定が困難なので、各染色体に特異的なBAC cloneを腫瘍組織および正常組織由来DNAプローブと同時にハイブリし、確実な染色体同定を行なえる方法を確立した。まず、反復配列の多いセントロメアはCGH解析に適さないので、各染色体のセントロメアに特異的なBACdoneをスクリーニングした。BAC cloneスクリーニングは、セントロメアにマップされているマイクロサテライトマーカーを用いてPCRを行い、BAC libraryからそのマーカーのみ含まれているBAC cloneをスクリーニングし、そのDNAを抽出して染色体同定用のプローブとした。各々のプロープについてFISHを行い、確実にセントロメアにシグナルが観察されたことを確認した。腫瘍組織由来DNAはSpectrumRedで、正常組織由来DNAはSpectrum Greenで標識し、BAC cloneはCGH解析に支障のないよう、波長の異なる蛍光色素Cy5で標識した。rasH2マウスにMNUを投与して形成された前胃乳頭腫5検体についてCGH解析したところ、ゲノム異常は認められなかった。同様にUrethaneにより形成された肺腫瘍8検体でもゲノム異常は認められなかった。今後、rasH2マウスに形成された各種腫瘍において本研究で確立したCGH法によりゲノム異常領域の検索を行うことが重要である。

COH (Comparative genomic) Hybridization) method is used to establish the method of abnormal field of abnormality, ra sH2 マウスに Formation されたswelling のゲノムAbnormal field をExploration することをPurpose としてThis research is carried out った. The conditions for the preparation of chromosome specimens are based on the MASUK brand cell culture system. After the brand cells are recovered, ConA, LPS, and PHA are used for culture and mitoindex.また, hypotonic processing time and temperature を検して, good chromosomal specimens をmanufacturing した. The origin of tumor tissue and normal tissue are determined by the identification of DNA and the CGH method is determined by the appropriate conditions. Good analysis of CGH The characteristics of the DNA fluorophore mark are determined by taking into account the specific characteristics of the optical substance and the concentration of each substance. The size of each chromosome is uniform, the size of each chromosome is uniform, the same difficulty is determined, and the BAC is specific to each chromosome Clone tumor tissue and normal tissue origin DNA synchronization method and confirm chromosome homogeneity and establish the method.まず, の多いセントロメアはCGH analysis of repeated arrangement にAdaptation さないので, various dyes Color body のセントロメアにSpecial なBACdoneをスクリーニングした. BAC cloneスクリーニングは、セントロメアにマップされているマイクロサテライトマーカーを用いてPCRを行い、BAC libraryからそのマーカーのみ有まれているBAC Clone をスクリーニングし, そのDNA を extracted chromosomes and のプローブとした. Each 々のプロープについてFISHを行い, confirmed のにセントロメアにシグナルが観看されたことをconfirmed した. DNA derived from tumor tissue is Spectrum Red, DNA derived from normal tissue is marked Spectrum Green, BAC clone is analyzed by CGH, and the wavelength is different and the photopigment Cy5 is marked. rasH2 マウスにMNUをinvestment and して formation された forestomach papilloma 5検body についてCGH analysis したところ, ゲノムabnormal はidentification められなかった. Same as Urethane's pulmonary swelling and ulcer, 8 検体's abnormality and abnormality. In the future, rasH2 will cause various tumors and this research will establish the importance of CGH method in abnormal areas.