根の表皮細胞分化に関わるシロイヌナズナCPC遺伝子の機能発現機構の解析

拟南芥CPC基因参与根表皮细胞分化的功能表达机制分析

• 批准号: 11740443
• 负责人: 槻木 竜二
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11740443/
• 关键词: シロイヌナズナ; 根毛; 表皮細胞; CPC遺伝子; 蛋白質複合体; 細胞自立性

ある蛋白質が他の蛋白質と複合体を形成し、機能発現していることはよくある。生体内でCPC蛋白質が蛋白質複合体を形成しているかを検討した。シロイヌナズナ野生型の根では、CPC蛋白質の含量が非常に低く、生化学的解析が困難であることがわかったので、カリフラワーモザイクウィルスの35SプロモーターによってCPC蛋白質が過剰発現しているシロイヌナズナ形質転換体を用いて実験した。結果は以下の通りである。1)CPC蛋白質は94アミノ酸から成る分子量約11万の比較的小さな蛋白質で、1次構造上可溶性だと予想されるにもかかわらず、非常に可溶化されにくかった。SDSのような強力な界面活性剤存在下でのみ、可溶化された。2)架橋剤を用いた実験から、CPC蛋白質がそれ自体単独で存在するのではなく、高分子量体で存在することが示唆された。3)架橋剤存在下で根のホモジェネートを調製し、そのホモジェネートから界面活性剤で抽出した架橋済み可溶性蛋白質画分をグリセロール密度勾配を用いた沈降速度遠心にかけて、蛋白質をその大きさ、各々に固有の沈降係数Sの違いにより分画した。その結果、CPC蛋白質がその単量体の分子量よりも大きな分子量のところに検出された。以上の結果はCPC蛋白質が蛋白質複合体を形成していることを示唆した。CPC蛋白質複合体を精製し、どのような蛋白質がCPC蛋白質と複合体を形成しているか調べるために、CPCヒスチジンタグ融合蛋白質が過剰発現しているシロイヌナズナ形質転換体を作製した。CPC蛋白質にヒスチジンタグが付いているので、アフィニティーカラムクロマトグラフィーにより、比較的容易にCPC蛋白質を植物体から分離精製することができる。同形質転換体で、CPCヒスチジンタグ融合蛋白質がCPC蛋白質としての機能を果たしていること、ヒスチジンタグのアフィニティーカラムクロマトグラフィーで簡単に濃縮できることを確認した。

The complex of other proteins is formed, and the machine can be used to detect the target protein. CPC protein, protein and protein in vivo. The results showed that the content of CPC protein was very low, and the biochemical analysis was difficult. There was no significant difference between the two groups in biochemical analysis. 35s, 35s, 35s, 35 S, 35 S, 35 S, 35 The results show that the following results are correct. 1) the molecular weight of CPC protein is about 110000, which is smaller than that of soluble protein, soluble protein and soluble protein. The interfacial activity of SDS is soluble and soluble in the presence of interfacial activity. 2) the presence of high molecular weight (HMW), high molecular weight (HMW), high molecular weight (HMW) and high molecular weight (HMW), respectively, in the presence of high molecular weight molecules. 3) in the bottom of the frame, there is a lot of information on the surface activity of the interface, the extraction of the frame, the soluble protein, the density matching, the sinking speed, the heart, the protein, the inherent sink, the drop, the drop. The results showed that the molecular weight of CPC protein was measured, and the molecular weight was measured. The above results showed that the combination of CPC protein and protein showed that there was no significant difference between the two groups. The fusion proteins of CPC protein, CPC protein and CPC protein were detected by Elisa, Elisa, PCR, Elisa, DNA fusion protein fusion protein, DNA fusion protein and DNA fusion protein. CPC protein, plant body, sperm extract, protein, protein The fusion protein of the fusion protein CPC protein was cloned into the body of the same type of virus, and the fusion protein of CPC protein was detected. The results showed that the fusion protein could not be detected, and the fusion protein was detected.