膜結合型アミノペプチダーゼファミリーに属する新規酵素類の生理的役割の解明

阐明属于膜结合氨肽酶家族的新型酶的生理作用

• 批准号: 11740463
• 负责人: 松本 英子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11740463/
• 关键词: 胎盤性ロイシンアミノペプチダーゼ; オキシトシナーゼ; 脳・神経系; PC12細胞; 脂肪細胞由来ロイシンアミノペプチダーゼ; 腎臓; 組み換え型タンパク質; 金属ペプチダーゼ; ペプチドホルモン

妊婦血中の酵素、胎盤性ロイシンアミノペプチダーゼ(P-LAP、オキシトシナーゼ)は、オキシトシンレベルの調節を通じて妊娠の維持に働く。当グループが行ったcDNAクローニングにより、P-LAPはアミノペプチダーゼAやアミノペプチダーゼNなどと、一次構造上の相同性が高く、活性中心に亜鉛分子を共通してもつ一つのファミリーをなすことが示されるとともに、非妊娠時にも種々の組織で発現していることが判明し、多様な機能をもつことが示唆された。前年度の研究より、P-LAPはMet-エンケファリンやニューロキニンAなどの神経ペプチドをも分解することが判明し、脳・神経系においても重要な機能を担う可能性が示唆されたため、本年度はその解明を目指し、P-LAPの脳・神経系における発現について詳しく調べた。P-LAPタンパク質の発現は、ラット脳内の広い部域で神経細胞のみに認められた。またラット培養神経細胞PC12では、分化に伴いP-LAPの発現が約2.5倍上昇した。この細胞でP-LAPは膜画分に存在し、免疫染色により神経突起および神経細胞体中にドット状のシグナルが確認されたため、ベシクルの膜に存在することが示唆された。またアデニル酸シクラーゼの活性化剤フォルスコリンによる刺激で、細胞表面P-LAPが約30%増加したため、P-LAPはフォルスコリン調節性ベシクルに存在すると考えられた。一方、ブレフェルジンA処理により細胞表面P-LAPは約二分の一に減少し、P-LAPが局在するベシクルはトランスゴルジネットワークに関与していることが示唆された。一方、同じファミリーに属し、P-LAPと特に相同性が高い脂肪細胞由来ロイシンアミノペプチダーゼは、組み換え型タンパク質にアンギオテンシン分解作用とキニン変換作用が認められ、腎臓の遠位尿細管および集合管に発現していたことから、血圧調節に関与している可能性が示唆された。

孕妇血液中的酶，胎盘亮氨酸氨基肽酶（P-LAP，催产酶）通过调节催产素水平来维持妊娠。我们组执行的cDNA克隆表明，p-lap与氨基肽酶A和氨基肽酶N具有较高的原发性结构同源性，即使锌分子在活性中心是共同的，即使在非孕激素中，它也似乎也在各种组织中表达，这表明它具有多种功能。上一年的一项研究表明，p-lap还会降解诸如含有脑脑和神经蛋白A之类的神经肽，这表明它可能在大脑和神经系统中起重要作用。今年，我们旨在阐明这一点，并详细研究了脑和神经系统中p挡的表达。仅在大鼠脑的广大区域中的神经元中观察到p盖蛋白的表达。此外，在大鼠培养的神经元PC12中，随着分化的分化，p圈的表达增加了约2.5倍。在这些细胞中，膜级分中存在p-圈，免疫染色在神经突和神经元细胞体中证实了点样信号，表明它们存在于囊泡的膜中。此外，用激活剂福斯科蛋白刺激腺苷酸环化酶增加了30％的细胞表面p-lap，这使得它认为P-LAP存在于Forskolin调节的囊泡中。另一方面，用Brefeldin A降低细胞表面的P-LAP的治疗大约一半，这表明具有p-lap定位的囊泡参与了反式高尔基网络。另一方面，属于同一家族的脂肪细胞衍生的亮氨酸氨基肽酶在重组蛋白中具有血管紧张素降解和激肽转化的作用，并且在远端小管中表达，并在基础上收集了小子的管道，表明其在远端小管中表达，并表明其在远端小管中表达。

项目成果

Matsumoto H.,Rogi T.,Yamashiro K.,Kodama S.,Tsuruoka N.,Hattori A.,Takio K.et al.: "Characterization of a recombinant soluble form of human placental leucine aminopeptidase/oxytocinase expressed in Chinese hamster ovary cells"European Journal of Biochemis

Matsumoto H.、Rogi T.、Yamashiro K.、Kodama S.、Tsuruoka N.、Hattori A.、Takio K.等人：“在中国仓鼠卵巢中表达的人胎盘亮氨酸氨肽酶/催产素酶的重组可溶形式的表征

Hattori A,Kltatani K,Matsumoto H,Miyazawa S,Rogi T,Tsuruoka N,Mizutani S,Natori Y,Tsujimoto M.: "Characterization of recombinant human adipocyte-derived leucine aminopeptidase expressed in Chinese hamster ovary cells"Journal of Biochemistry. 128(5). 755-7

Hattori A、Kltatani K、Matsumoto H、Miyazawa S、Rogi T、Tsuruoka N、Mizutani S、Natori Y、Tsujimoto M.：“在中国仓鼠卵巢细胞中表达的重组人脂肪细胞来源的亮氨酸氨肽酶的表征”生物化学杂志。

Tsujimoto M,Matsumoto H,Hattori A.: "Biochemical characterization of placental leucine aminopeptidase/oxytocinase and its related enzyme, adipocyte-derived leucine aminopeptidase.In : Cell-surface aminopeptidases : Basic and clinical aspects.Eds.by Mizuta

Tsujimoto M、Matsumoto H、Hattori A.：“胎盘亮氨酸氨肽酶/催产素酶及其相关酶、脂肪细胞来源的亮氨酸氨肽酶的生化特征。In：细胞表面氨肽酶：基础和临床方面。Eds.by Mizuta