精子ベクターによる魚類への外来遺伝子導入技法の開発

开发利用精子载体将外源基因引入鱼类的技术

• 批准号: 11760133
• 负责人: 吉崎 悟朗
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760133/
• 关键词: トランスジェニック; 精子; 遺伝子組み換え; エレクトロポーレーション; 浸透圧; 遺伝子導入魚; コイ; 育種

魚類の新たな育種法を確立するため、簡便にかつ大量に遺伝子導入魚を作出することが可能な、精子ベクターによる魚類への外来遺伝子導入技法の開発を行った。具体的にはコイの精子を外来DNA溶液中に懸濁し、その後高圧電気パルスを加えることで、精子細胞膜に一過性の孔をあけ、そこから外来DNAが精子内部に流入することを促した。さらに得られた精子を通常の方法で未受精卵に媒精することで遺伝子導入コイの作出に成功した。続いて、本法における遺伝子導入効率を上げるため、まず、精子を高調液に浸すことで脱水し、その後等調液に浸すことで脱水精子に急激に吸水を促す処理を施した。ここで脱水精子が吸水中に高圧電気パルスを加えることで、上記の方法の3倍以上の高率で外来遺伝子導入コイの作出に成功した。また、本方法は生残率にもほとんど影響が無いため、将来マイクロインジェクション法にかわる遺伝子導入技法に成りうることが示唆された。さらに、マウス等で報告されている、精子を外来DNAと混合した後に媒精に用いる方法も試したが、この方法では遺伝子導入を行うことは出来なかった。

A new breeding method for fish was established. It was simple and easy to introduce a large number of foreign genes into fish. It was possible to introduce foreign genes into fish sperm. Specifically, sperm foreign DNA is suspended in a solution, and then high-voltage electricity is added to the sperm cell membrane to facilitate the inflow of foreign DNA into the sperm. In addition, the obtained sperm was transferred to unfertilized eggs using the usual method, and the transfer of the sperm into the egg was successful. In this method, the sperm introduction rate is increased, the sperm is immersed in high temperature solution, the sperm is dehydrated, the sperm is immersed in high temperature solution, and the sperm is dehydrated. The method described above has more than 3 times the success rate of introducing foreign sperm into the sperm. The method has the following advantages: 1. the generation rate is higher than that of the original generation rate; 2. the generation rate is higher than that of the original generation rate; 3. the generation rate is higher than that of the original generation rate; 4. the generation rate is higher than that of the original generation rate; and 5. the generation rate is higher than that of the original generation rate. The method of introducing foreign DNA into sperm cells was studied.

项目成果

吉崎悟朗,森田哲朗 ら: "遺伝子導入魚を利用した生殖腺刺激ホルモン生産の試み"月刊海洋. Feb-32. 127-131 (2000)

Goro Yoshizaki、Tetsuro Morita 等人：“尝试使用转基因鱼生产促性腺激素”月刊 Kaiyo 127-131（2000 年）。

Kang,J.,Yoshizaki,G. ら: "Effects of an osmotic differential on the efficiency of gene transfer by EP of fish spermatozoa."Aquaculture. 173. 297-307 (1999)

Kang, J., Yoshizaki, G. 等人：“渗透压差异对鱼类精子 EP 基因转移效率的影响”173. 297-307 (1999)。

吉崎悟朗: "トランスジェニック技法の水産育種への応用.次世代の水産バイオテクノロジー"成山堂書店. 14 (2000)

吉崎五郎：“转基因技术在渔业育种中的应用。下一代渔业生物技术” Seizando Shoten 14（2000）。

Takeuchi,Y.,Yoshizaki,G. ら: "GFP as a cell labeling tool and a reporter of gene expression in transgenic rainbow trout."Marine Biotechnology. 1. 448-457 (1999)

Takeuchi, Y., Yoshizaki, G. 等人：“GFP 作为转基因虹鳟鱼基因表达的报告工具。”1. 448-457 (1999)。

J.Kang, G.Yoshizaki: "Effect of an osmotic differetial on the efficiency of gene transfer by electroporation of fish spermatozoa"Aquaculture. 173. 297-307 (1999)

J.Kang、G.Yoshizaki：“渗透压差对鱼类精子电穿孔基因转移效率的影响”水产养殖。