精子ベクターによる魚類への外来遺伝子導入技法の開発

开发利用精子载体将外源基因引入鱼类的技术

基本信息

批准号：
11760133
负责人：
吉崎悟朗
金额：
$ 1.41万
依托单位：
東京水産大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

魚類の新たな育種法を確立するため、簡便にかつ大量に遺伝子導入魚を作出することが可能な、精子ベクターによる魚類への外来遺伝子導入技法の開発を行った。具体的にはコイの精子を外来DNA溶液中に懸濁し、その後高圧電気パルスを加えることで、精子細胞膜に一過性の孔をあけ、そこから外来DNAが精子内部に流入することを促した。さらに得られた精子を通常の方法で未受精卵に媒精することで遺伝子導入コイの作出に成功した。続いて、本法における遺伝子導入効率を上げるため、まず、精子を高調液に浸すことで脱水し、その後等調液に浸すことで脱水精子に急激に吸水を促す処理を施した。ここで脱水精子が吸水中に高圧電気パルスを加えることで、上記の方法の3倍以上の高率で外来遺伝子導入コイの作出に成功した。また、本方法は生残率にもほとんど影響が無いため、将来マイクロインジェクション法にかわる遺伝子導入技法に成りうることが示唆された。さらに、マウス等で報告されている、精子を外来DNAと混合した後に媒精に用いる方法も試したが、この方法では遺伝子導入を行うことは出来なかった。

为了建立一种新的育种鱼类方法，我们使用精子矢量开发了一种用于外源基因转移到鱼中的技术，该技术允许以简单而大量的大量生产基因转移鱼类。具体而言，将鲤鱼精子悬浮在外源性DNA溶液中，然后应用高压电脉冲以打开精子细胞膜中的瞬态孔，促使外源DNA流入精子内的精子中。此外，使用通常的方法将获得的精子介导未施用的卵中，并成功产生了基因转染的鲤鱼。接下来，为了提高基因转移在这种方法中的效率，首先通过将其浸泡在高控制溶液中，然后浸入均匀的溶液中以快速促进吸收吸水。在这里，通过在吸收脱水精子的过程中施加高压电脉冲，外国基因转移的鲤鱼的产生成功，其速率超过上述方法。此外，由于该方法对生存率几乎没有影响，因此已经提出，它可能是一种替代微注射方法的遗传转移技术。此外，我们还尝试了一种在小鼠中报道的方法，例如将精子与外源DNA混合，然后将其用于精液中，但是该方法不允许基因转移。

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

吉崎悟朗,森田哲朗ら: "遺伝子導入魚を利用した生殖腺刺激ホルモン生産の試み"月刊海洋. Feb-32. 127-131 (2000)

Goro Yoshizaki、Tetsuro Morita 等人：“尝试使用转基因鱼生产促性腺激素”月刊 Kaiyo 127-131（2000 年）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Kang,J.,Yoshizaki,G. ら: "Effects of an osmotic differential on the efficiency of gene transfer by EP of fish spermatozoa."Aquaculture. 173. 297-307 (1999)

Kang, J., Yoshizaki, G. 等人：“渗透压差异对鱼类精子 EP 基因转移效率的影响”173. 297-307 (1999)。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

吉崎悟朗: "トランスジェニック技法の水産育種への応用.次世代の水産バイオテクノロジー"成山堂書店. 14 (2000)

吉崎五郎：“转基因技术在渔业育种中的应用。下一代渔业生物技术” Seizando Shoten 14（2000）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Takeuchi,Y.,Yoshizaki,G. ら: "GFP as a cell labeling tool and a reporter of gene expression in transgenic rainbow trout."Marine Biotechnology. 1. 448-457 (1999)

Takeuchi, Y., Yoshizaki, G. 等人：“GFP 作为转基因虹鳟鱼基因表达的报告工具。”1. 448-457 (1999)。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

J.Kang, G.Yoshizaki: "Effect of an osmotic differetial on the efficiency of gene transfer by electroporation of fish spermatozoa"Aquaculture. 173. 297-307 (1999)

J.Kang、G.Yoshizaki：“渗透压差对鱼类精子电穿孔基因转移效率的影响”水产养殖。

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通讯作者：
吉崎悟朗