フジツボ着生誘起タンパク質の分子生物学的解析

藤壶沉降诱导蛋白的分子生物学分析

• 批准号: 11760142
• 负责人: 生田 享介
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kochi University of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760142/
• 关键词: フジツボ; 着生誘起タンパク質; 幼生; 分子生物学

・キプリス幼生を用いたバイオアッセイアカフジツボMegabalanus rosaの1.5M Tris-HCl緩衝液に懸濁し遠心・濾過した粗抽出液とこれを硫酸アンモニウムで塩析した分画を,それぞれドットブロット装置を用いてニトロセルロース膜に吸着させた.これを基質として幼生が付着するかどうかで誘引活性の有無を調べた.・タンパク質の精製・解析上記の硫安分画をPharmacia FPLC systemを用いたDEAE Sepharose^<TM>カラムによるイオン交換クロマトグラフィーにかけ,得られたそれぞれの分画をニトロセルロース膜に吸着させ,同様のバイオアッセイを行った.また各分画をSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動法で解析した.・組織標本の作成とレーザー共焦点走査型顕微鏡観察免疫染色法で着生誘起タンパク質の局在を調べるための前段階として,タテジマフジツボBalanus amphitrite成体と幼生の標本作成を行った.成体では切片作成を容易にするため通常本体から殻を取り除くが,本研究では殻下の組織も観察対象とするため固定液中で脱灰を行い,wholeの組織切片を作成した.幼生ではRNase処理したのちヨウ化プロピジウム染色を施して核染したwholeの標本をレーザー共焦点走査型顕微鏡で観察した.・cDNAライブラリーの作成cDNAライブラリーの作成のためのmRNA抽出を試みた.

・キプリス小生を用いたバイオアッセイアカフジツボMegabalanus rosaの1.5M Tris-HCl buffer, suspension, centrifugation, filtration, crude extract, sulfuric acid, etc.ニウムで塩したdrawing を, それぞれドットブロット device を いてニトロセルロース Film に attracts さ せ た . こ れ を matrix と し て puerile が pays す る か ど う か で induces active のThere is no をadjusted べた.・タンパクqualityのrefining・Analysis of the above mentioned sulfur anhydride painting をPharmacia FPLC system is used DEAE Sepharose^<TM>カラムによるイオンExchange クロマトグラフィーにかけ,get られたそれぞれの片をニトロセルロース片に sucking させ, 同様のバイオアッセイを行った.またeach divided painting is をSDS ポリAnalyzing and analyzing tissue specimens using AMC electrophoresis method and preparing tissue specimens using confocal walk-through microscopic examination. The dyeing method is used to induce the quality of the material in the early stage of the をadjusted べるためのとして, タテジマフジツボBalanus Adult and juvenile specimens of amphitrite can be prepared easily. Adult specimens can be easily prepared by slicing them, and the normal body can be removed from the shell. In addition, in this study, the tissue under the shell was inspected and degreased in the fixative, and whole tissue sections were prepared. Raw RNase treatment, RNase treatment, RNase staining, nuclear staining, whole sample preparation, confocal walkthrough The type of microscopic examination is done.・cDNAライブラリーの成cDNAライブラリーの成のためのmRNA extractionをtestみた.