新型黄色ブドウ球菌エンテロトキシン診断法の開発

金黄色葡萄球菌肠毒素诊断新方法的研制

• 批准号: 11760213
• 负责人: 重茂 克彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Iwate University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760213/
• 关键词: S.aureus; Staphylococcal enterotoxin; recombinant DNA; protein expression; diagnosis

近年、あいついで新型ブドウ球菌エンテロトキシン(SE)H型、G型、I型の存在が報告された。これら新型SEによる食中毒事例はいまだ報告されていないが、実験的には嘔吐活性が確認されており、食中毒原性は否定できないことから、これら新型毒素の診断方法の確立は重要である。本研究では、これら新型SEの分子生物学的および免疫学的検出法の確立を目的とし、以下の成果を得た。A.新型エンテロトキシン(SE)の大腸菌発現系確立と抗血清の作成ならびにSandwich ELISAによる免疫学的検出法の確立平成11年度に、seg,seh,sei遺伝子をクローニングした。さらに大腸菌発現系により精製組換え型SEG、SEHおよびSEIを調製してウサギに免疫し、抗毒素血清を作製した。平成12年度にはこれらの抗血清の特異性、反応性を確認するとともに、アフィニティクロマトグラフィーにより特異抗体を生成し、ホースラディッシュペルオキシダーゼを結合することにより、標識抗体を作成してSEG,SEH,SEI毒素を検出するSandwich ELISAを確立した。B.PCR法による毒素遺伝子検出法の確立平成11年度にseg、sehおよびsei遺伝子を検出するためのPCRプライマーを設計・合成し、multiplex PCRにより同時にseg、sehおよびsei遺伝子を検出する系を確立した。平成12年度は、このmultiplex PCRを既報のSEA〜SEEを検出するmultiplex PCRとあわせることにより、SEA〜SEI遺伝子を検出する系を確立するとともに、PCRの偽陰性を排除するために鋳型DNAの抽出法についても検討した。以上、本研究により、新型SEの高感度な免疫学的検出法と遺伝子診断法を確立することができた。今後、本法を応用することにより、食中毒由来ブドウ球菌、食品由来ブドウ球菌の遺伝子型と毒素産生性について疫学的調査を進めることが可能となった。

In recent years, the existence of new types of bacteria (SE)H, G and I has been reported. The cases of food poisoning caused by the new type of SE are reported, the vomiting activity is confirmed, the food-borne toxicity is denied, and the establishment of diagnostic methods for the new type of SE is important. This study aims to establish molecular biology and immunology methods for detecting novel SE. The following results were obtained. A. Establishment of a new type of E. coli development system, preparation of antiserum, Sandwich ELISA, immunologic assay, and establishment of a new type of E. coli development system. The development of E. coli is a process of preparation of SEG, SEH and SEI. The specificity and reactivity of antisera were confirmed in the 12th year of Pingcheng. The Sandwich ELISA was established. B. Establishment of PCR method for toxin gene detection In 2001, seg, seh and sei gene detection was designed, synthesized and multiplexed PCR was established simultaneously with seg, seh and sei gene detection. In 2012, the multiplex PCR was reported to SEA ~ SEE for detection, multiplex PCR was established for detection, and false negatives for PCR were excluded for detection. In this study, we established a new immunologic method to detect and diagnose SE. In the future, this method will be used to investigate the origin of food poisoning, the origin of food poisoning, the genetic type of food poisoning, and the production of toxins.

项目成果

Hu D-L,Omoe K,Shimura H,Ono K,Sugii S,Nakane A,Shinagawa K: "Analysis on the neutralizing epitope on staphylococcal enterotoxin A responsible for emetic activity."J Vet Med Sci. 63(3). 237-241 (2001)

Hu D-L，Omoe K，Shimura H，Ono K，Sugii S，Nakane A，Shinakawa K：“对负责催吐活性的葡萄球菌肠毒素 A 上的中和表位进行分析。”J Vet Med Sci。