赤痢アメーバにおける遺伝学的手法の開発に関する研究

溶组织内阿米巴遗传方法的研究进展

• 批准号: 11770133
• 负责人: 佐貫 潤一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770133/
• 关键词: 赤痢アメーバ; 形質転換; プロモーター; 遺伝子発現; ノックアウト; アンチセンス; トランスフェクション

赤痢アメーバの嚢子化機構は伝播に必須である。嚢子化機構を詳細に解析するために、関連種であるEntamoeba invadensを用いて、嚢子化に伴う遺伝子発現調節機構解析のための基礎的遺伝学手法の開発を試みた。E.invadensにおいて逆遺伝学的手法を導入するために、まず、リポソーム及びエレクトロポーレションを用いた遺伝子導入の可能性を検討した。導入プラスミドは赤痢アメーバのレクチン及びシステイン合成酵素遺伝子のプロモーターを蛍ルシフェラーゼレポーター遺伝子に繋げたものを用いた。リポフェクチン、リポフェクタミンなど数種のリポソームを用いても、エレクトロポーレションを用いても、E.invadensにルシフェラーゼの活性を検出することはできなかった。そこで、E.invadens特異的プロモーターの獲得を目的として細胞内小胞輸送において分子スイッチとして機能する低分子量GTP結合蛋白をコードする遺伝子を7種類獲得し、現在、全塩基配列を決定している。また、更に、他のE.invadens由来のプロモーターを用いて発現プラスミドを作成し、レポーター遺伝子導入を成功させようと試みている。

The organization of red fever must be carried out. The development of genetic methods for analyzing and analyzing the mechanism of genetic evolution in detail, related species and applications, and genetic evolution and regulation mechanism of genetic evolution in association with genetic evolution are explored. E. Invaders to explore the possibility of introducing a novel technology into the Internet. The application of the enzyme gene in the production of protein and protein is discussed. A number of different solutions are available in different applications, such as E.invadens, and E.invadens. E. invadens-specific proteins are obtained for the purpose of intracellular cellular transport and function. Low molecular weight GTP binding proteins are obtained for the purpose of determining 7 types of proteins. In addition, the E.invadens were successfully introduced into the system.

项目成果

Sanuki,J.,Nakano,K.,Tokoro,M.Nozaki,T.,Okuzawa E.Kobayashi,S.,and Asai,T.: "Purification and Identification of Major Soluble 40-kda antigenic protein from Entamoeba histolytica : its application for serodiagnosis of asymptomatic amebiasis"Parasitology Int

Sanuki,J.、Nakano,K.、Tokoro,M.Nozaki,T.、Okuzawa E.Kobayashi,S. 和 Asai,T.：“溶组织内阿米巴主要可溶性 40-kda 抗原蛋白的纯化和鉴定：其