新しい胎児性血管内皮細胞由来の細胞外基質蛋白Dellの血管新生に及ぼす作用の検討

新しい胎児性細胞外基質蛋白であるDel1のトランスジェニックマウス作製は、当初予定していたβアクチンプロモーター(全身性に発現)ではその発現が弱いことが判明し、方針を変更。全身への発現から血管内皮特異的な発現(特に胎生期)にすることにし、プロモーターをTie-2の第一イントロンを含んだものに変更した。またDel1の発現部位を正確に同定するために、β-galactosidase遺伝子を挿入したコンストラクトを再度作製。受精卵への打ち込みを行い、ファウンダーを得た。現在1ラインが確立し、ほか数ラインを確立中であるが、確立された1ラインでは、そのホモ接合体もlethalではなかった。現在フェノタイプについて検索中である。Del1ノックアウトマウスに関しては、米国スタンフォード大学循環器内科T.Quertermousラボとの共同研究により、ようやくキメラが生まれた。その後、ホモ接合体を得るためにキメラ同士を掛け合わせ、生まれてきたマウスをテイルブロットでホモとへテロの割合を調べてみると、ホモの割合がその予想される値より極端に少ない。よって、ホモはどうやら基本的にはembryonic lethalと思われるが、中には正常に近く生まれてくるものもあり、その結果はまだ混沌としている。そこで、胎生期の血管新生に異常が認められないかどうかを、ヘテロ同士を掛け合わせ、胎生約9.5日前後でsacrificeして胎児を取り出し、その胎児を詳細に検討するという手法で、現在調査中である。

新しい胎児性細胞外基質蛋白であるDel1のトランスジェニックマウス作製は、当初予定していたβアクチンプロモーター(全身性に発現)ではその発現が弱いことが判明し、方針を変更。全身への発現から血管内皮特異的な発現(特に胎生期)にすることにし、プロモーターをTie-2の第一イントロンを含んだものに変更した。またDel1の発現部位を正確に同定するために、β-galactosidase遺伝子を挿入したコンストラクトを再度作製。受精卵への打ち込みを行い、ファウンダーを得た。現在1ラインが確立し、ほか数ラインを確立中であるが、確立された1ラインでは、そのホモ接合体もlethalではなかった。現在フェノタイプについて検索中である。Del1ノックアウトマウスに関しては、米国スタンフォード大学循環器内科T.Quertermousラボとの共同研究により、ようやくキメラが生まれた。その後、ホモ接合体を得るためにキメラ同士を掛け合わせ、生まれてきたマウスをテイルブロットでホモとへテロの割合を調べてみると、ホモの割合がその予想される値より極端に少ない。よって、ホモはどうやら基本的にはembryonic lethalと思われるが、中には正常に近く生まれてくるものもあり、その結果はまだ混沌としている。そこで、胎生期の血管新生に異常が認められないかどうかを、ヘテロ同士を掛け合わせ、胎生約9.5日前後でsacrificeして胎児を取り出し、その胎児を詳細に検討するという手法で、現在調査中である。