アトピー性皮膚炎患者の血清IgEと黄色ブドウ球菌の分泌蛋白との結合に関する研究

特应性皮炎患者血清IgE与金黄色葡萄球菌分泌蛋白结合的研究

• 批准号: 11770442
• 负责人: 市川 栄子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770442/
• 关键词: アトピー性皮膚炎; 黄色ブドウ球菌; 血清IgE

Hanifin and Rajkaの診断基準により診断したアトピー性皮膚炎患者約40名より採血をおこない、血清分離をした。個々の症例について末梢血好酸球、血清IgE(RIST)値を測定した。また個々の患者皮膚から可能な限り細菌培養をおこない、分離培養された4症例のS.aureusを収集し、液体培地内で凍結保存をした。このS.aureusを液体培地で培養し、培養上清を採取し、約1/50に濃縮し、この蛋白を電気泳動し、1次抗体として患者血清を用い、2次抗体として抗ヒトIgE抗体を用いてウエスタンブロットを行い、患者血清中のIgEと反応するS.aureusの蛋白を検討した。この際、S.aureusはProtein Aをはじめとしてヒトイムノグロブリンと非特異的に反応する蛋白を有しているため、非アレルギーのコントロール血清との反応と比較し、アトピー性皮膚炎患者に特異的に反応するバンドの有無を検討した。また非特異的に2次抗体とも反応することが多かったため、数社より発売されている抗ヒトIgE抗体を試し、もっとも非特異反応の少ないものを選択した。その結果、アトピー性皮膚炎患者の30から40%に特異的に反応するバンドが2種類検出されたため、そのうちの2種類のバンドにかんして大型のゲルからバンドをカットし、マイクロエレクトロエリューターを用いてゲルから蛋白を抽出し、蛋白シークエンサーを用いて蛋白を同定したが、N末端がブロックされているために通常の蛋白シークエンサーで同定が不可能であったため、2種類のバンドに関してペプチドマップを作製し、蛋白を同定したところ、従来報告されているエンテロトキシン以外の蛋白を検出した。

Hanifin and Rajka's diagnostic criteria include blood sampling and serum isolation from approximately 40 patients with dermatitis. In each case, peripheral blood acidosis and serum IgE(RIST) values were measured. The patient'S skin may be isolated from bacteria, cultured in isolation, or frozen in liquid culture. S.aureus is cultured in liquid medium, culture supernatant is collected, concentrated to about 1/50, protein is electrophoresis, primary antibody is used in patient serum, secondary antibody is used in anti-IgE antibody, protein of S.aureus is detected in patient serum. In this case, S.aureus Protein A is a protein that is specific to non-specific dermatitis patients. There are also many non-specific secondary antibodies and antibodies, and several companies have released anti-IgE antibodies to test, and there are few non-specific antibodies to select from. Results: 30 to 40% of patients with acute dermatitis had 2 types of specific anti-inflammatory reactions, 2 types of anti-inflammatory reactions, 3 types of anti-inflammatory reactions, 4 types of anti-inflammatory reactions, 3 types of anti-inflammatory reactions, 3 types of anti-inflammatory reactions, 4 types of anti-inflammatory reactions, 3 types of anti-inflammatory reactions, 4 types of N-terminal protein identification is not possible, 2 kinds of protein identification is possible, protein identification is possible, and protein identification is possible.

项目成果

Eiko Ichikawa et al.: "Screening of Genomic DNA Library and Recombinant Expression : A New Approach to the Question of Allergic Response to Bacterial Proteins"International Archives of Allergy and Immunology. (in press). (2001)

Eiko Ichikawa 等人：“基因组 DNA 文库和重组表达的筛选：解决细菌蛋白过敏反应问题的新方法”国际过敏和免疫学档案馆。