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アルツハイマー病脳におけるcdk5活性と神経原線維変化形成との関連

阿尔茨海默病脑中CDK5活性与神经原纤维缠结形成的关系

基本信息

批准号：
11770554
负责人：
高橋恵
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は「アルツハイマー病脳におけるCdk5活性と神経原線維変化形成との関連」の研究の条件決定を中心に行った。関連病院で死亡した痴呆患者及び痴呆のない老人の剖検脳の右側の嗅内皮質の組織約1gを切り出し、皮質と白質にわけ各々のホモジネートを作製し、抗Cdk5抗体により免疫沈降を行なった。そのサンプル液に基質としてtau,neurofilamentH,KSP peptide,histoneを加え、リン酸化酵素活性を測定したところ、通常の条件下ではtau,KSP peptide,histoneではリン酸化が認められたが、neurofilamentHはリン酸化されなかった。この時のホモジネート量と酵素活性との関係はhistoneを基質とすると容量依存性が認められたが、tauに関しては一定量で活性が定常状態となった。tauに対する酵素活性が最大となる最低量のホモジネート量(蛋白濃度2.0mg/ml)に固定し、多数の凍結脳の酵素活性をtau,KSP peptide,histoneを基質として測定し、現在、結果の解析中である。なおtau,KSP peptide,histoneのリン酸化はcdc2特異的阻害剤であるBtyrolactoneI 2 μMで90%以上の阻害が認められた。また免疫沈降物をSDS-PAGEゲルで分離し、PVDH膜に転写してWestern Blotを行った結果、Cdk5によるバンドが認められた。以上より、確かにCdk5が免疫沈降され、タウ蛋白をリン酸化していることが確認された。同時に左側大脳半球を4%パラフォルムアルデヒドにて固定し、パラフィン切片を作製し、神経病理学的診断を行った。今後、パラフィン切片上で左側の嗅内皮質の神経原線維変化含有神経細胞と、残存神経細胞数を測定し、酵素活性との相関関係の有無を検索する予定である。

In the current year, the disease has been affected, and the activity of Cdk5 has been greatly improved. The conditions determine the center of the study. The patients with dementia and the elderly with dementia were killed in the hospital. The right olfactory endothelium tissue was cut out, the skin was cut, and the anti-Cdk5 antibody was immunized. In general, it is necessary to measure the activity of acidifying enzymes, such as tau,neurofilamentH,KSP peptide,histone, acid enzyme activity, acid enzyme activity, acid enzyme activity, The activity of enzyme, the activity of enzyme, the capacity dependence of histone, the capacity of tau, the activity of enzyme and the steady state of enzyme activity were determined. Tau enzyme activity, maximum enzyme activity, minimum enzyme activity, protein concentration (2.0mg/ml), enzyme activity, tau,KSP peptide,histone enzyme activity, enzyme activity, enzyme More than 90% of the total BtyrolactoneI 2 μ M of the acidified cdc2 special block is over 90%. The immune deposit was isolated by SDS-PAGE, the results of Western Blot were written by PVDH membrane, and the results were detected by Cdk5. The above tests confirmed that Cdk5 immuno-precipitation and protein acidification were confirmed. At the same time, 4% of the left hemisphere was fixed, the sections were cut, and the pathology of the brain was broken. After that, the endothelial cells were detected on the left side of the section, and the number of residual cells was determined, and the enzyme activity was determined.