全身麻酔の機序としてのバックグラウンドカリウムチャンネルの役割について

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本研究の研究目的は、ほ乳類の神経細胞由来のバックグラウンドチャンネルにおいて、全身麻酔薬の影響を確認して、最終的にはカリウムチャンネルを単離することであった。研究計画書の実施計画に記したように、まずマウス全脳組織において逆転写酵素を用いて作成したcDNAライブラリーを約100のライブラリーに分割した。次に、雌のアフリカツメガエルから、健康な卵母細胞を分離し、先に作成したcDNAライブラリーから作成したmessenger RNAを卵母細胞へmicroinjectionして、卵母細胞への発現を試みた。3日後にチャンネル蛋白が発現したかどうかを自作perufusion systemに連結したchamberに卵母細胞をセットし生理食塩水還流下にボルテージクランプを用いて確認した。何らかのチャンネルの発現が約60%の卵母細胞に認められたが、臨床的濃度に相当するハロセンまたはペントバルビタール含有生理食塩水を用いて還流を行ないボルテージクランプをおこなった結果、有意な透過電流の増大をみた卵母細胞を含むライブラリーは残念ながら見つからず、全身麻酔薬によって影響をうけるバックグラウンドカリウムチャンネルを単離する事はできなかった。同様の実験をマウス海馬組織を用いて再度おこなったが、同様にこの実験系ではライブラリーを特定し、カリウムチャンネルを単離する事はできなかった。そこで、現在は引き続き神経培養細胞に実験系を移しパッチクランプ法によって、検討を加えているところである。