網膜神経細胞への新しい外来遺伝子導入方法の開発とその応用

视网膜神经元导入外源基因新方法的建立及其应用

• 批准号: 11771047
• 负责人: 秋元 正行
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771047/
• 关键词: 遺伝子治療; 細胞間物質輸送; bcl-xL; アポトーシス; 網膜変性症; アデノウイルス; アデノ関連ウイルス; VP22; アデノウイルスベクター; 遺伝子導入

本研究の目的は(1)細胞間輸送能を持つVP22の効果を網膜組織において検討すること、(2)抗アポトーシス遺伝子bcl-2、bcl-xlを産生する組換えウイルスを作製し、網膜変性ラット、網膜虚血再灌流モデル動物に対する治療的効果を検討することである。これらの研究から新しい遺伝子導入法の開発とその応用を試みた。(1)前年度はアデノウイルスベクターを用いてVP22とEGFPの融合タンパクを産生する組換えウイルス(AxCAVP22EGFP)を作成した。本年度は、この組換えウイルス体を正常ラット網膜下、網膜変性ラット網膜下へ注入し遺伝子導入効率、蛋白伝播効率を調べた。いずれのラットにおいても網膜色素上皮細胞には、in vivoでも効果的にGFP蛋白が伝播され、注入部位全般に蛍光が確認された。一部、視細胞にも蛍光を発する細胞を認めたがAdeno-associated virus(AAV)、Human Immunodeficiency Virus(HIV)ベクターで報告されているほどの伝播効率は認めなかった。(2)抗アポトーシス蛋白bcl-xLを発現するAxCAVP22bcl-xLを作成した。現在、細胞培養系および、網膜変性ラットモデル(RCSラット)60匹を用いて、AAVCAbcl-xLと神経細胞保護効果について比較検討した。網膜色素上皮細胞および視細胞にも遺伝子が導入されたことが確認され、電気生理学的、および組織学的に有意な差が認められた。以上の結果から、bcl-xLを産生する組換えウイルスは網膜神経細胞のアポトーシスを強く抑制することから、網膜変性症の遺伝子治療の有用な候補遺伝子と考えられる。

The objectives of this study were to (1) investigate the effects of VP22 on intracellular transport in retinal tissue, and (2) investigate the effects of anti-apoptotic gene bcl-2 and bcl-xl on the production of apoptotic genes in retinal tissue, retinal blood reperfusion, and retinal blood reperfusion in animals. The research on this topic is based on the development and application of new gene introduction methods. (1)In the previous year, the AxCAVP22EGFP was created by using the AxCAVP22 EGFP fusion technology. This year, we will adjust the efficiency of gene introduction and protein dissemination in different tissues. In vivo, GFP protein was detected in retinal pigment epithelial cells, and the injection site was completely identified by fluorescence. A part of the visual cells that emit light are identified by Adeno-associated virus(AAV) and Human Immunodeficiency Virus(HIV). (2)Anti-virus protein bcl-xL was developed by AxCAVP22. At present, cell culture lines, retinal sex profile (RCS profile)60 samples were used, and AAVCAbcl-xL and neuroprotective effects were compared. Omentum pigment epithelial cells and optic cells are introduced into the brain to identify, electrophysiologically, and histologically. The above results show that Bcl-xL can be used as a candidate for the treatment of retinal disorders.